[发明专利]一种脂质代谢型肥胖基因体质评估的方法

摘要

本发明公开了一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，通过同时检测分析个体的ABCA1基因、LPL基因、PPARG基因、ADRB3基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供脂质代谢型肥胖体质评估，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。

主权项

1.一种脂质代谢型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，具体步骤为步骤1：检测的样品类型与采样方法用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2：基因组DNA的抽提方法采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时－2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3：荧光定量PCR反应将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）rs2230806；脂蛋白脂酶（LPL）rs320；过氧化物酶体增生激活受体γ（PPARG）rs1801282；肾上腺素受体（ADRB3）rs4994，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan®-MGB技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μl，即浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl10X荧光定量PCR反应缓冲液ABITaqman®MGB、0.1μl25mMdNTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μl25mMMgCl₂溶液、0.02μl（5units/μl）TaqDNA聚合酶、去离子水4.98μl、4个位点分别采用不同的正向引物（20μM，0.225μl）、反向引物（20μM，0.225μl）、VIC荧光探针（10μM，0.25μl）和FAM荧光探针（10μM，0.25μl）工具进行检测（探针、引物、序列如下）；三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）rs2230806带VIC荧光A型探针CAAaGGAGAAACT带FAM荧光G型探针CAAgGGAGAAACT正向引物AAGTCTGTGCAATGGATCAAAA反向引物CTCACCAGGATTGGCTTCAGcataaattgcaaaatagtgaggatgttgttcatctaataaaagtggttccaggaattcagactctggattcctgtttgccaaatcatgtgtcccactcttaagaaaacgagttggactctggatttttctttgcaagagggacaagagtgtgggagatactgagttaatgcaacttgcaggttttaagtgtcctgtcattgtgccttgtgctttgatacattctgagtttcagtaaagagacctgatgcattggactgttgcaatggaacctgttttaagatcttcaaagctgtattgatatgaagttctccaaaagacttcaaggacccagcttccaatcttcataatcctcttgtgcttgtctctctttgcatgaaatgcttccaggtatttttgcaaggctaccagttacatttgacaagtctgtgcaatggatcaaaatcagaagagatgattcaacttggtgaccaagaagtttctgagctttgtggcctaccaarggagaaactggctgcagcagagcgagtacttcgttccaacatggacatcctgaagccaacctggtgagtagacttgctcactggagaaacttcaagcactaatgctttcggaatgtgaggcttttccttggacagcatgactttgttttgtagaaaagtacggctggctgggagtttgtgatataatttagttcagtggtattctaagtgttcttagtgttctttcagacttttgggccatctcccaaagggtgaatgggaagaataagctgggtgtggctgagtttaagccaaaagttttttgtgcttgtttcaatcagagaagacctgctttttcatgtttttactattataatactaagcaagagctcatttgaaaacagagttcttcatatttaaaaaaaaaaagtcttgaaaccattgatgggaagatggatatctatttatgtttaaaaacccatcataaagatgacattgtgggctgtcacagttggaaggc脂蛋白脂酶（LPL）rs320带VIC荧光G型探针AGCgTTTATACTA带FAM荧光T型探针AGCtTTTATACTA正向引物CCACCCATGTGTACCCATAAA反向引物TTTGGTGATACAAGCAAATGACaggagagactcagaaaaagtaattaaatgtatttttcttccttcactttagacccccacctgatgtcaggacctaggggctgtatttcaggggccttcacaattcagggagagctttaggaaaccttgtatttattactgtatgatgtagattttctttaggagtcttcttttattttcttatttttggggggcagggggggggaagtgacagtatttttgtatttcatgtaaggaaaacataagccctgaatcgctcacagttattcagtgagagctgggattagaagtcaggaatctcagcttctcatttggcactgtttcttgtaagtacaaaatagttagggaacaaacctccgagatgctacctggataatcaaagattcaaaccaacctcttcaagaagggtgagattccaagataatctcaacctgtctccgcagccccacccatgtgtacccataaaatgaattacacagagatcgctataggatttaaagcktttatactaaatgtgctgggattttgcaaactatagtgtgctgttattgttaatttaaaaaactctaagttaggattgacaaattatttctctttagtcatttgcttgtatcaccaaagaagcaaacaaacaaacaaaaaaaaaaagaaaaagatcttggggatggaaatgttataaagaatcttttttacactagcaatgtctagctgaaggcagatgccctaattccttaatgcagatgctaagagatggcagagttgatcttttatcatctcttggtgaaagcccagtaacataagactgctctaggctgtctgcatgcctgtctatctaaattaactagcttggttgctgaacaccaggttaggctctcaaattaccctctgattctgatgtggcctgagtgtgacagttaattattgggaatatcaaaacaattacccagcatgatcatgtattatttaaacagtcctgacaga过氧化物酶体增生激活受体γ（PPARG）rs1801282带VIC荧光C型探针GACcCAGAAAGCG带FAM荧光G型探针GACgCAGAAAGCG正向引物GCAAACCCCTATTCCATGCT反向引物TACATAAATGCCCCCACGTCagctttctggtatttcataagcaagagatttaagttttccatttaagaagcaattgtgaattttacaacaataaaaaatgcaagtggatattgaacagtctctgctctgataattctaaatacagtacagttcacgcccctcacaagacactgaacatgtgggtcaccggcgagacagtgtggcaatattttccctgtaatgtaccaagtcttgccaaagcagtgaacattatgacacaactttttgtcacagctggctcctaataggacagtgccagccaattcaagcccagtcctttctgtgtttattcccatctctcccaaatatttggaaactgatgtcttgactcatgggtgtattcacaaattctgttacttcaagtctttttcttttaacggattgatcttttgctagatagagacaaaatatcagtgtgaattacagcaaacccctattccatgctgttatgggtgaaactctgggagattctcctattgacscagaaagcgattccttcactgatacactgtctgcaaacatatcacaaggtaaagttccttccagatacggctattggggacgtgggggcatttatgtaagggtaaaattgctcttgtagttgtcttccaggttgtgtttgttttaatactatcatgtgtacactccagtattttaatgcttagctcgttgctatcgcgttcatttaaaaacatgttcagaaccttaaaaaaggaaacctaacctaatctattttatctctgtgcatggctcccatttcctgaattttaagcattaaaggtatagttatatccaaaaacaatcctgttcatttttatttcctgagtttgcatagatttcccaagaatacataagggctttttagacttgaagggtcactttttcctcttttcatctcatatgttagagatctctcataactgtttttatccctcttgcagcacttttattcctcttgaagtactctcagctcttttctgt肾上腺素受体（ADRB3）rs4994带VIC荧光C型探针GCCcGGACTCCGA带FAM荧光T型探针GCCtGGACTCCGA正向引物ATCCAGTACCCCTTGGTTCC反向引物GTTTCCCTGAGGCTGTCTTGttcctccagatttagctaaaggaaacgtggagcatcccattggccatcctccccactctccaattcggctccagaggcccctccagactataggcagctgcccctttaagcgtcgctactcctcccccaagagcggtggcaccgagggagttggggtggggggaggctgagcgctctggctgggacagctagagaagatggcccaggctggggaagtcgctctcatgccttgctgtcccctcccctgagccaggtgatttgggagaccccctccttccttctttccctaccgccccacgcgcgacccggggatggctccgtggcctcacgagaacagctctcttgccccatggccggacctccccaccctggcgcccaataccgccaacaccagtgggctgccaggggttccgtgggaggcggccctagccggggccctgctggcgctggcggtgctggccaccgtgggaggcaacctgctggtcatcgtggccatcgccyggactccgagactccagaccatgaccaacgtgttcgtgacttcgctggccgcagccgacctggtgatgggactcctggtggtgccgccggcggccaccttggcgctgactggccactggcgttgggcgccactggctgcgagctgtggacctcggtggacgtgctgtgtgtgaccgccagcatcgaaaccctgtgcgccctggccgtggaccgctacctggctgtgaccaacccgctgcgttacggcgcactggtcaccaagcgctgcgcccggacagctgtggtcctggtgtgggtcgtgtcggccgcggtgtcgtttgcgcccatcatgagccagtggtggcgcgtaggggccgacgccgaggcgcagcgctgccactccaacccgcgctgctgtgccttcgcctccaacatgccctacgtgctgctgtcctcctccgtctccttctaccttcctcttctcgtgatgctcttcgtctacgcgcgggttttcgtggtg将反应孔和空白对照在PCR扩增仪上进行反应，先进行预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟、反应结束后取出后再放入荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，得到三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）rs2230806；脂蛋白脂酶（LPL）rs320；过氧化物酶体增生激活受体γ（PPARG）rs1801282；肾上腺素受体（ADRB3）rs4994四张图;步骤4：SNP基因型分析将荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的4个图和一个NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型；（1）、三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）rs2230806在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为AA基因型、坐标轴右上区域为AG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型，（2）、脂蛋白脂酶（LPL）rs320在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为GG基因型、坐标轴右上区域为GT基因型、坐标轴右下区域为TT基因型，（3）、过氧化物酶体增生激活受体γ（PPARG）rs1801282在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为CC基因型、坐标轴中间区域为CG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型，（4）、肾上腺素受体（ADRB3）rs4994在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为CC基因型、坐标轴右上区域为CT基因型、坐标轴右下区域为TT基因型。