[发明专利]三七细胞悬浮培养的方法

摘要

本发明公开了一种三七细胞悬浮培养的方法，包括如下步骤：1）三七根灭菌及愈伤组织的诱导：2）选择步骤1）经筛选、传代后的生长速度快、质地松散、嫩白色透明状的愈伤组织转移到液体培养基中进行悬浮培养，添加新鲜液体培养基，培养6-8天，将悬浮的大块愈伤组织过滤除去，滤过的悬浮细胞于更换后的液体培养基中继续悬浮培养，筛选分散度好、均匀、生长快、淡黄色透明的悬浮细胞作为种子，将种子于更换后的液体培养基中继续悬浮培养，获得高产皂苷的细胞株，本发明的方法具有快速可行，可以提供均一培养物的优点。工艺简单，成本低廉，重复性好。在短期内生产次级代谢物皂苷含量高。

主权项

一种三七细胞悬浮培养的方法，其特征在于包括如下步骤：1）三七根灭菌及愈伤组织的诱导：将三七的根用清水洗净后，烘干，在超净工作台中用酒精喷洒三七根表面，火焰灼烧灭菌，用灭过菌的解剖刀在三七根表面割1～2cm的切口，并沿切口断开，把表皮内部的组织切成小块接到固体培养基上，在23±2℃，暗培养55‑65天，再每隔4周继代培养一次，继代培养的次数为3‑5次，进行筛选、传代；2）三七细胞悬浮培养：选择步骤1）经筛选、传代后的生长速度快、质地松散、嫩白色透明状的愈伤组织按接种量为20g/L‑25g/L转移到液体培养基中进行悬浮培养，每3‑5天添加相当于所述液体培养基体积5%的新鲜液体培养基，培养6‑8天，将悬浮的大块愈伤组织用纱布过滤除去，滤过的悬浮细胞按接种量为20g/L‑25g/L于更换后的液体培养基中继续悬浮培养，每隔19‑21天继代一次，筛选分散度好、均匀、生长快、淡黄色透明的悬浮细胞作为种子，将种子按接种量为20g/L‑25g/L于更换后的液体培养基中继续悬浮培养，每隔19‑21天继代一次，共继代3‑5次，获得高产皂苷的细胞株，所述悬浮培养的条件：转速为110‑130r·min^‑1的摇床培养，1000mL三角瓶中装400mL液体培养基，培养温度为23±2℃。