[发明专利]一种NAD类似物的还原方法

摘要

本发明公开了一种NAD类似物的还原方法及其应用。该方法中还原剂为亚磷酸化合物，催化剂为可利用亚磷酸化合物的亚磷酸脱氢酶，亚磷酸脱氢酶氧化亚磷酸化合物的同时，将NAD类似物转化为其还原态。该方法可用于生产还原态NAD类似物或氘代的还原态NAD类似物，也可为消耗还原态NAD类似物的酶促反应提供还原力，还原态的NAD类似物可作为辅酶应用于苹果酸酶ME‑L310R/Q401C、D–乳酸脱氢酶DLDH‑V152R、酿酒酵母醇脱氢酶等酶催化的还原反应，有利于NAD类似物的广泛应用。该NAD类似物还原方法可在温和的条件下，再生还原态NAD类似物用于苹果酸或乳酸的制备；也可作为一种氧化还原力调控微生物体内苹果酸或乳酸的代谢强度。

主权项

1.一种NAD类似物的还原方法，其特征在于：还原剂为亚磷酸或亚磷酸盐或氘代亚磷酸或氘代亚磷酸盐，催化剂为亚磷酸脱氢酶；所还原的NAD类似物为NCD、NFCD、NClCD、NBrCD、NMeCD、NGD、NTD和NUD中的一种或二种以上，它们的化学结构如下：当R=H时是NCD， 当R=F时是NFCD， 当R=Cl时是NClCD， 当R=Br时是NBrCD， 当R=Me时是NMeCD；亚磷酸脱氢酶为psPDH‑L151V/D213Q、rsPDH‑I151R、rsPDH‑I151R/E213C或rsPDH‑I151R/I218F中的一种或两种以上；NAD类似物的还原方法特征在于：所述亚磷酸脱氢酶还原NAD类似物，采用pH5–8的缓冲液体系，反应温度为10°C–40°C，得到的还原态NAD类似物；缓冲液体系中亚磷酸脱氢酶浓度4 μg/mL–500 μg/mL、NAD类似物的浓度0.01 mM–20 mM、还原剂的浓度0.4 mM–25 mM。