[发明专利]一种南通小方柿组培快繁方法

摘要

本发明涉及一种南通小方柿组培快繁方法，属于农作物快繁技术领域。研究了休眠芽消毒方法，确定了适于小方柿早期和中期继代增殖的培养基成分，分析了不同细胞分裂素、生长素对组培苗生长的影响。将取自南通小方柿一年生枝条上的休眠芽剥掉外层鳞片，用流水冲洗2小时后分别用75%酒精、10%双氧水消毒，将消毒处理好的休眠芽接种于基本培养基中，待萌发后转接到继代增殖培养基上。本方法基本解决了南通小方柿初代褐化严重的问题，初代成活率达到80%。通过添加适量赤霉素解决了南通小方柿继代增殖问题。促进了矮生型柿品种南通小方柿的快速繁育和生产推广工作。

主权项

一种南通小方柿的组培培快繁方法，其特征在于：（1）消毒处理取南通小方柿一年生枝条上的休眠芽，剥去外面2‑3片鳞片，流水冲洗2‑3小时；将休眠芽转放到超净工作台上，用75%酒精表面杀菌30s后无菌水冲洗3遍；之后将休眠芽放入10%双氧水中浸泡20min，浸泡期间须不停晃动使双氧水产生大量气泡，最后用无菌水冲洗3次，放到垫有无菌吸水纸的培养皿中；（2）出芽培养：将经过消毒的休眠芽接种于含有500mg/L PVP不添加生长素和细胞分裂素的MS培养基上培养2周；培养温度为25～28℃,光照时间16～18h/d，光照强度为1500‑2000lx；（3）继代增殖培养将上一步培养2周的休眠芽接种于I号继代培养基中，继代培养2‑3代后改用II号继代培养基培养2‑3代；所述的I号继代培养基配方为MS(1/2N)+玉米素2mg/L+萘乙酸0.05mg/L+PVP500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L；II号继代培养基配方为MS(1/2N)+玉米素1mg/L+萘乙酸0.05mg/L+PVP500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L；培养温度为25～28℃,光照时间16～18h/d，光照强度为1500‑2000lx；上述每代均培养25‑30天。组培苗继代培养4‑5代后用III号培养基和IV号培养基交替培养，交替培养时将前一代培养的组培苗腋芽切下插入培养基进行增殖扩繁培养，每种培养基继代增殖培养25‑30天，培养温度为25～28℃,光照时间16～18h/d，光照强度为1500‑2000lx；III号培养基配方为（1/2N）MS+玉米素1.0mg/L+吲哚‑3‑乙酸0.05‑0.3mg/L+赤霉素GA₃0.05mg/L+PVP500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，或（1/2N）MS+玉米素1.0mg/L+IBA0.05mg/L+赤霉素GA₃0.05mg/L+PVP500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L；IV号培养基配方为（1/2N）MS+玉米素1.0mg/L+吲哚‑3‑乙酸0.05‑0.3mg/L+PVP500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，或（1/2N）MS+玉米素1.0mg/L+IBA0.05mg/L+PVP500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L。