[发明专利]一种抗ZEN卵黄抗体及其制备方法

摘要

本发明属于免疫学技术领域，具体涉及一种抗ZEN（玉米赤霉烯酮）的卵黄抗体及其制备方法。抗ZEN的卵黄抗体通过将人工合成ZEN-BSA抗原对蛋鸡免疫接种，收集鸡蛋，从蛋黄中分离纯化获得ZEN卵黄抗体。本发明所提供的抗ZEN卵黄抗体针对ZEN抗原，特异性高、效价比高，可替代现有的鼠源性的单克隆抗体；所提供的抗ZEN卵黄抗体的制备方法相对于现有的鼠源性的单克隆抗体，其成本低、产量大，利于ZEN快速反应检测体系的建立，因而在农产品及食品安全检测中具有积极的应用意义。

主权项

一种抗ZEN卵黄抗体，其特征在于，该抗体采用以下步骤制备：（1）利用Thouvenot法和碳二亚胺法，人工合成ZEN‑BSA抗原；（2）将人工合成ZEN‑BSA抗原对蛋鸡免疫接种，免疫3~5次后收集鸡蛋；具体包括以下步骤：（2‑1）将步骤（1）制备的ZEN‑BSA抗原粉末溶于PBS中，然后将溶解有ZEN‑BSA的PBS与佐剂乳化制得免疫用ZEN‑BSA抗原；（2‑2）将步骤（2‑1）制得的免疫用ZEN‑BSA抗原免疫接种蛋鸡3~5次；（2‑3）免疫接种蛋鸡完成后2~3周收集鸡蛋，持续收集1~2个月，收集的鸡蛋4℃保存；（3）从步骤（2）获得鸡蛋中分离纯化ZEN卵黄抗体；具体包括以下步骤：（3‑1）将步骤（2）获得的鸡蛋外壳消毒，打蛋收集蛋黄；（3‑2）将步骤（3‑1）收集的蛋黄加入无菌双蒸水稀释，充分混匀，调节pH值，4℃条件下静置12~24小时；（3‑3）将步骤（3‑2）的混合液离心，收集得到N升上清液；（3‑4）将步骤（3‑3）收集的上清液缓慢加入硫酸铵，混匀溶解；4℃放置 12~24h，离心弃上清，收集沉淀；（3‑5）将步骤（3‑4）收集的沉淀用去离子水稀释溶解恢复到N升后，加入硫酸钠，混匀溶解，置室温过夜，离心弃上清，用去离子水溶解沉淀恢复至N升后，亲和层析柱纯化，滤膜除菌，即得无菌抗ZEN卵黄抗体提取液；（3‑6）将步骤（3‑5）所得无菌抗ZEN卵黄抗体提取液真空冷冻干燥得抗ZEN卵黄抗体干粉成品。