[发明专利]以电化学发光生物传感器检测DNA甲基转移酶的方法及应用有效
| 申请号： | 201410128514.5 | 申请日： | 2014-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN103901020A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 李延;闫曌 | 申请（专利权）人： | 西北大学 |
| 主分类号： | G01N21/76 | 分类号： | G01N21/76;G01N21/69 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 710069 陕西省西安市*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明涉及的一种以电化学发光生物传感器检测DNA甲基转移酶的方法，将S1含有甲基化位点GATC的发夹DNA序列自组装在金电极的表面，组成电化学发光生物传感器；将修饰电极用甲基转移酶甲基化，再用甲基化限制性内切酶酶切，淋洗后，用S2带氨基的互补DNA进行杂交，再将氧化石墨烯负载邻菲啰啉钌复合物通过EDC-NHS的耦合连接到电极上进行电化学发光检测，以此来实现对甲基转移酶的测定。本发明采用氧化石墨烯提供相对大的比表面积用于负载邻菲啰啉钌，且氧化石墨烯与邻菲啰啉钌是非共价结合，能有效地负载和易于操作并且能保持氧化石墨的电子结构，以此为发光材料使本发明的传感器对甲基转移酶有很高的灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 电化学 发光 生物 传感器 检测 dna 甲基转移酶 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种以电化学发光生物传感器检测DNA甲基转移酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将S1通过金巯键自组装固定在金电极上；所述S1为含有甲基化位点GATC的发夹DNA序列；2）以待测甲基转移酶对步骤1）固定在电极上的S1进行甲基化；3）用甲基化限制性内切酶酶切步骤2）甲基化后的S1；4）以S2与步骤3）酶切后保留在电极上的S1杂交；所述S2为带氨基的互补DNA；5）把氧化石墨烯负载邻菲啰啉钌复合物通过EDC‑NHS的耦合连接到步骤4）杂交后的电极上；6）对步骤5）的电极进行电化学发光检测，由此测定待测的甲基转移酶。
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