[发明专利]一种海马活性糖蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种海马活性糖蛋白的制备方法，特点是包括以下步骤：a.将冷冻干燥后的海马粉粹，采用CO₂超临界流体萃取技术脱除脂肪酸；配置0～0.25mol/L的NaCl浸提液，与脱脂海马按照1:10～1:35（mL/g）的比例混合于锥形瓶中，摇匀后首先进行超声波辅助提取20min，再置于水浴锅中于30℃～80℃下热水浸提1～6h，最后滤纸过滤，上清液即为糖蛋白混合溶液；b.海马糖蛋白的纯化：采取Sevage法和乙醇分级沉淀法。将粗纯品用蒸馏水复溶，3500Da透析袋透析72h脱盐，冷冻干燥，得到海马糖蛋白粗纯品，优点是省时、高效，全程无有毒有害试剂的残留和污染，并确保了制取糖蛋白的活性。

主权项

一种海马活性糖蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）海马前处理：将海马洗净冻好后，于‑40℃下冷冻干燥48‑72h，再用粉碎机粉碎，然后采用CO₂超临界流体萃取技术脱除脂肪酸，得到脱脂海马粉；（2）海马糖蛋白提取：将步骤（1）得到的脱脂海马粉与NaCl浓度为0～0.25mol/L的浸提液按（10～35）g：1mL的比例混合于锥形瓶中摇匀后，首先进行超声波辅助提取20min，再置于水浴锅中于30℃～80℃下浸提1～6h后，用滤纸过滤，得到的上清液即为海马糖蛋白混合溶液；（3）海马糖蛋白粗纯化：将步骤（2）得到的海马糖蛋白溶液减压浓缩至原体积的四分之一，得到糖蛋白样品液，将糖蛋白样品液采用Sevage法除游离蛋白，脱蛋白一次，4℃静置过夜，弃下层游离蛋白层；收集上层糖蛋白溶液，进行乙醇分级沉淀，然后将沉淀收集，将沉淀用丙酮、乙醚各洗涤2次，然后用蒸馏水复溶至8‑12mL，再用3500Da透析袋透析72h脱盐，冷冻干燥，得到海马糖蛋白粗纯品。