[发明专利]一种海水鱼内生吗啡的检测方法及其检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种海水鱼内生吗啡的检测方法及其检测试剂盒，主要采用直接竞争酶联免疫测定法，将以前酶联免疫法中繁琐的操作步骤进行精简、优化，检测快速、灵敏、准确，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批样品。

主权项

一种海水鱼内生吗啡的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品前处理取海水鱼的脑部神经节，用甲醇清洗，沥干，然后将脑部神经节撕碎，称取0.2±0.05g撕碎的脑部神经节，加入0.5‑2ml甲醇，70‑75℃水浴2‑3小时，冷却至室温，离心，取上清液于冷冻离心浓缩机中离心直至液体挥发完全，残渣用100‑200μl样品稀释液稀释，振荡器上振荡充分溶解得样品溶液；（2）试剂盒检测包被有吗啡特异性抗体的酶标板上的微孔编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做两孔平行，并记录样品孔和标准品孔所在位置；将样品溶液和吗啡标准品溶液均按照每孔20‑30μl的量加到对应微孔中，然后加入吗啡抗原酶标记物100‑120μl/孔，室温孵育30‑35分钟后倒去孔内液体，用洗涤液250‑300μl/孔洗涤3‑5次，加入显色剂100‑120μl/孔，室温孵育10‑15分钟，然后加终止液100‑120μl/孔终止，酶标仪450nm下测定每孔的吸光度值；（3）结果分析以标准品百分吸光率为纵坐标，以吗啡标准品浓度的对数为横坐标，绘制标准曲线图，将样品的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样品所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样品中内生吗啡的实际含量。