[发明专利]增强型CIK细胞制备方法以及细胞制剂

摘要

本发明公开了一种增强型CIK细胞制备方法以及细胞制剂，该方法从采集患者的外周血中分离得到外周血单个核细胞；将其置于无血培养基中培养，得到浓度1～3×106/ml的核细胞，加入IFN‑γ、植物血凝素和PGE2、并转移至培养瓶或培养袋中培养24h；然后加入CD3单抗，IL‑2，IL‑1α，IL‑4和GM‑CSF，继续培养3～5后控制细胞密度在1～6×106/ml，连续培养第14～21天后，离心收集得到增强型CIK细胞。该增强型CIK细胞制剂包括增强型CIK细胞、人血白蛋白、IL‑2、氨基酸、维生素和无机盐。CIK制剂在保存时间上较上述专利中的制剂有显著提高。在室温情况下从6小时提高到36小时。在临床应用中可靠性更高，安全性得到有效保障。

主权项

一种增强型CIK细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)从采集患者的外周血中分离得到外周血单个核细胞；将其置于无血培养基中培养，得到1×106个/ml的核细胞，加入IFN‑γ、植物血凝素和PGE2、并转移至培养瓶或培养袋中，在温度为37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养24h；其中：所述IFN‑γ的浓度：2000IU/ml，植物血凝素的浓度：100ng/ml，PGE2的浓度：50μg/ml；2)然后加入CD3单抗，IL‑2，IL‑1α，IL‑4和GM‑CSF，继续培养；CD3单抗的浓度：20μg/ml，IL‑2的浓度：1000IU/ml，IL‑1α的浓度：50ng/ml；IL‑4的浓度：100ng/ml；GM‑CSF的浓度为2000U/ml；3)培养3～5天后，添加含有IL‑2无血清培养基，控制细胞密度在1×106个/ml，其中：所述IL‑2的浓度：1000IU/ml；4)第7天开始每隔2～3天对培养的细胞进行计数，并根据细胞浓度添加含有IL‑2和亚硒酸钠的无血清培养基，连续培养第14～21天后，离心收集得到增强型CIK细胞，其中：所述IL‑2的浓度为1000IU/ml，亚硒酸钠的浓度为100μg/L。