[发明专利]以花柄为外植体的虎眼万年青离体快繁方法

摘要

本发明属于花卉繁殖方法，具体涉及花卉的无性快速繁殖方法。以虎眼万年青幼嫩的花柄为外植体，脱分化率及分化率均可达70％～75％以上。由一块外植体诱导的愈伤组织经反复继代可分化出300多株丛生芽。丛生芽生根率可达90％以上，在适宜环境下移栽成活率达95％以上。使虎眼万年青在相对短的时间内大规模繁殖出外观整齐的植株，再生植株变异低；再生体系非常高效；平均单株再生苗的成本极低，适合虎眼万年青的大批量高效快速繁殖，非常适用于工厂化生产。

主权项

以花柄为外植体的虎眼万年青离体快繁方法，其特征在于包括下列步骤：1)外植体接种及愈伤组织诱导：将虎眼万年青花絮下端幼嫩的花柄剪断取下，将幼嫩的花柄放入无菌超净台中，用75％(体积／体积)酒精浸泡1～2分钟，用0.1～0.2％(质量／体积)的升汞溶液浸泡5～10分钟，无菌水冲洗3～5遍。将幼嫩的花柄切为长度3～5mm的小块，接种在含6‑BA2～2.5mg／L、IBA0.1～0.2mg／L、蔗糖3.0～4.5％(质量／体积)，pH值为5.5～6.5的MS培养基上，20℃～30℃每天日光灯照射4～6小时，光照强度1500～2000Lux。25～30天继代一次，待长出黄绿色愈伤时即便可诱导分化。2)不定芽的诱导：将黄绿色的愈伤转接到含NAA(0.1～0.5mg／L)+KT(1.5～2.5mg／L)+琼脂(5～7g／L)+3.5～4.5％蔗糖(质量／体积)的MS诱导分化培养基，pH值为5.5～6.5，40～45天继代一次，20℃～30℃每天日光灯光照8～10小时，光照强度1500～2000Lux。该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经反复继代可分化出300多株的再生苗。3)根的诱导：再生植物转到1／2MS+NAA(1～2mg／L)+琼脂(5～7g／L)+蔗糖2％(质量／体积)，pH值为5.5～6.5的生根培养基上，20℃～30℃每天日光灯光照12小时左右，光照强度1500～2000Lux。4)再生植株移栽：植株生根后即可移栽，移栽至草炭∶蛭石∶细沙=3∶1∶1的种植基质中，移栽前将植株上的琼脂等杂物冲洗干净，种植基质121℃灭菌30～45分钟，8～12天浇一次透水便可成活。