[发明专利]一种定点整合外源基因的方法有效
| 申请号： | 201410152886.1 | 申请日： | 2014-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN103923940A | 公开（公告）日： | 2014-07-16 |
| 发明（设计）人： | 戴蕴平;王本利;丁方荣;李松;王海萍;郑敏;李京;李玲 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/11;C12N9/36 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;陈晓庆 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种定点整合外源基因的方法。本发明公开了一种定点整合外源基因到牛β-酪蛋白基因的第二外显子的方法，包括如下步骤：使TALE蛋白-Ⅰ和TALE蛋白-Ⅱ在离体的牛细胞中表达，得到第二外显子靶序列发生突变的细胞；同时将外源基因同源重组到靶序列位置，实现外源基因在牛β-酪蛋白基因的第二外显子上的定点整合。本发明的人溶菌酶基因或其它目的基因在乳腺中转录非常活跃的β-酪蛋白基因座定点整合，克服位置效应，避免目的基因表达沉默，可以实现人溶菌酶或其它重组蛋白在乳腺中较高水平表达，提高了转基因育种的成功率，同时可以节约后期生产纯化重组蛋白的成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 定点 整合 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种定点整合外源基因到牛β‑酪蛋白基因的第二外显子的方法，包括如下步骤：使TALE蛋白‑Ⅰ和TALE蛋白‑Ⅱ在离体的牛细胞中表达，得到第二外显子靶序列发生突变的细胞；同时将外源基因同源重组到靶序列位置，实现外源基因在牛β‑酪蛋白基因的第二外显子上的定点整合；所述TALE蛋白‑Ⅰ的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；所述TALE蛋白‑Ⅱ的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；所述靶序列如SEQ ID No.1所示。
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