[发明专利]一种检测植物蛋白质亚细胞定位的方法

摘要

本发明公开了一种检测植物蛋白质亚细胞定位的方法。该方法包括如下步骤：1）将融合基因（待测植物蛋白质基因-报告基因）克隆到植物表达载体，得到重组表达载体；2）将重组表达载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；3）向重组农杆菌中加入农杆菌侵染缓冲液，调节OD₆₀₀为0.1～0.3，20-25℃静置1-2h，得到侵染菌液；4）用针头在植物叶片上避开叶脉扎孔，用无针头注射器将侵染菌液从扎孔处注射至植物叶片内；5）培养植物2天，从注射部位取1-2cm²叶片；根据报告基因检测待测植物蛋白质在植物中的亚细胞定位。实验证明，本方法具操作简单、快速、标记效果好、重复性好的优点；还可用于基因表达调控及内含子功能研究等，对研究新基因功能和表达调控奠定了技术基础。

主权项

一种检测植物蛋白质亚细胞定位的方法，包括如下步骤：（1）将由待测植物蛋白质的编码基因和报告基因融合而成的融合基因克隆到植物表达载体中，得到表达所述融合基因的重组表达载体；（2）将所述重组表达载体转化至农杆菌感受态细胞中，得到重组农杆菌；（3）向所述重组农杆菌中加入农杆菌侵染缓冲液，调节OD₆₀₀为0.1～0.3，20‑25℃静置1‑2h，得到侵染菌液；（4）用注射器的针头在植物叶片上避开叶脉扎孔，然后用除去所述针头的所述注射器将所述侵染菌液从扎孔处注射至所述植物叶片内；（5）培养所述植物30‑48h后，从注射部位切取1‑2cm²的叶片作为待测材料；根据所述报告基因检测所述待测材料中由所述融合基因编码得到的蛋白质的亚细胞定位，从而确定所述待测植物蛋白质在所述植物中的亚细胞定位。