[发明专利]培养用于观察根肿菌侵染十字花科植株的方法

摘要

本发明提供一种培养用于观察根肿菌侵染十字花科植株的方法，取新鲜发病的十字花科植物的根组织制成根肿菌菌液，在石英砂中播下十字花科种子，用MS基本培养液浸湿石英砂及种子，并在光照强度为100μmolphotons/(m².s)、光照时间为16～18h、温度为20～22℃、湿度为75%以上的条件下，培养至种子萌发，再生长至长出2片真叶的植株；在每株植株的根部施加根肿菌菌液进行侵染，然后分阶段将侵染的植株根系用生物显微镜观察，直至侵染阶段结束。本发明操作简便且观察结果清晰，占用空间小，试验成本低，具有操作安全、简单、重复性强，观察方便、结果清晰的优点。

主权项

一种培养用于观察根肿菌侵染十字花科植株的方法，其特征在于经过下列各步骤：（1）取新鲜的被根肿菌侵染而发病的十字花科植物的根组织并搅碎，经孔径为25μm的纱布过滤，将滤液于3000r/min的转速下离心分离9min，去上清液，然后在沉淀物中加入适量蒸馏水，于4000r/min的转速离心分离12min，去上清液，再在沉淀物中加入适量蒸馏水，于4000r/min的转速离心分离12min，去上清液，之后在沉淀物中加入蒸馏水悬浮沉淀物，直至得到1×10⁷CFU/mL的根肿菌菌液，于4℃下保存备用；（2）在消毒石英砂中播下消毒十字花科种子，用MS基本培养液浸湿石英砂及种子，在光照强度为100μmol photons/ (m².s)、光照时间为16～18h、温度为20～22℃、湿度为75%以上的条件下，培养至种子萌发，再生长至长出2片真叶的植株，其间每2天补加1次MS基本培养液，以保持石英砂及种子的湿润；（3）在步骤（2）的每株植株的根部施加0.5mL步骤（1）的根肿菌菌液进行侵染；（4）从侵染后的第4天开始，随机取出部分步骤（3）所得的植株，并洗去植株根部的沙子，从根部选取大小均匀的根系，剪下包括根尖部分在内的1～2cm的侧根，置于载玻片上，于生物显微镜下观察，如此每隔2天随机取出部分步骤（3）所得的植株，进行一次显微观察，直至侵染阶段结束。