[发明专利]流感病毒RNA聚合酶纯化或结晶的方法有效
| 申请号： | 201410162758.5 | 申请日： | 2014-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN105002149B | 公开（公告）日： | 2018-04-06 |
| 发明（设计）人： | 刘迎芳 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生物物理研究所 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12N15/866 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100101*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种流感病毒RNA聚合酶纯化或结晶的方法。本发明提供的流感病毒RNA聚合酶结晶的方法，为先将流感病毒RNA聚合酶的PB1亚基编码基因、PA亚基编码基因和PB2亚基截短体的编码基因在昆虫细胞中共表达、纯化，得到RNA聚合酶，再将所述RNA聚合酶与RNA结合形成复合体，再将所述复合体结晶，得到流感病毒RNA聚合酶晶体；所述PB2亚基截短体为PB2亚基氨基酸序列自N末端起前126位氨基酸残基形成的蛋白。本发明的实验证明，经过使用不同的PB2截短体尝试，发现含有PB2氨基端126位氨基酸片段的流感病毒聚合酶复合体表达量更高，每升昆虫细胞培养液可以纯化出10毫克蛋白，优于其它截短体表达量；纯度好，降解轻微；结晶重复性更好、晶体更好更大、衍射也更强。 | ||
| 搜索关键词： | 流感病毒 rna 聚合 纯化 结晶 方法 | ||
【主权项】：
一种流感病毒RNA聚合酶复合体表达、纯化及结晶的方法，为先将流感病毒RNA聚合酶的PB1亚基编码基因、PA亚基编码基因和PB2亚基截短体的编码基因在昆虫细胞中共表达、纯化，得到RNA聚合酶，再将所述RNA聚合酶与RNA结合形成复合体，再将所述复合体结晶，得到流感病毒RNA聚合酶晶体；所述PB2亚基截短体为PB2亚基氨基酸序列自N末端起前126位氨基酸残基形成的蛋白；所述流感病毒为A型流感病毒；并且PB1亚基、PA亚基和PB2亚基来自同一病毒毒株H5N1。
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