[发明专利]用于卵巢癌早中期快速诊断试剂盒的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于卵巢癌早中期快速诊断试剂盒的制备方法，包括的步骤如下(1)抗原的制备将半乳糖凝集素‑3、转甲状腺素蛋白、癌抗原‑125和人附睾蛋白4基因制得所需的抗原；(2)捕获抗体的制备将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体；(3)检测抗体的制备将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体；(4)捕获抗体包被；(5)封闭和加样。本发明的有益效果如下最全面的检测卵巢癌，能够更好的判断绝经前或绝经后盆腔肿块的良恶性，更好地对妇科良性卵巢肿块和囊肿与卵巢癌进行鉴别诊断，具有灵敏度高准确性强的特点，其灵敏度及准确性均达到96％以上。

主权项

用于卵巢癌早中期快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于.包括的步骤如下：(1)抗原的制备：将半乳糖凝集素‑3、转甲状腺素蛋白、癌抗原‑125和人附睾蛋白4基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到所需的抗原；(2)捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体；(3)检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体；(4)捕获抗体包被：①.用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液将浓度为1μg/ml的捕获抗体包被微量滴定板的孔；②.封盖微量滴定板并在4℃下孵育过夜；③.弃去包被液，并用洗涤液洗涤微量滴定板两次，每次在微孔中加入200μl PBST，除去洗涤液，除去剩余的液滴，晾干放于4℃环境中备用；(5)封闭和加样：每孔添加200μl封闭缓冲液，封闭包被孔中剩余的蛋白质结合位点，用粘合塑料制品封盖微量滴定板并在37℃下孵育至少1小时，所述检测抗体的制备方法包括的步骤如下：(1)抗原的制备：通过分子克隆的方法把半乳糖凝集素‑3、转甲状腺素蛋白、癌抗原‑125和人附睾蛋白4基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到抗原；(2)检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物，得到相应的多克隆抗体为检测抗体。