[发明专利]一种人体液的显色法真菌1,3‑β‑D‑葡聚糖检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种人体液的显色法真菌1，3‑β‑D‑葡聚糖检测试剂盒，包括反应主剂、主剂复溶液、样本处理液、无热源水、标准品及质控品，反应主剂以鲎血细胞为主要原料，含有G因子、凝固酶、凝固酶原及多肽显色基质，其中多肽显色基质为Gly‑Arg末端连接PNA的合成三肽或四肽，通过采用凝固酶酶切此种多肽显色基质，产生游离的对硝基苯胺(PNA)后，用酶标仪直接进行检测，缩短了检测路线，降低了成本，由于酶标仪进行速率法酶动力学检测法，相对浊度法检测法，灵敏度更高，而且反应主剂不易受到体液标本中蛋白及药物的干扰产生非特异性浊度，使本发明的检测结果假阳性的概率降低，检测准确度更高。

主权项

一种人体液的显色法真菌1，3‑β‑D‑葡聚糖检测试剂盒，其特征在于包括：反应主剂；主剂复溶液：0.01‑1mol/mL Tris‑HCl缓冲液和0.01‑0.3mol/mL Mg2+；样本处理液：0.5‑2mol/mL KCl和0.05‑0.5mol/mL KOH；无热源水；标准品；质控品；所述反应主剂以鲎血细胞为主要原料，含有G因子、凝固酶、凝固酶原及多肽显色基质；所述反应主剂的制备方法包括以下步骤：1)采血与分离细胞：将活体鲎清洗，使用酒精或碘酒将心门消毒，使用无热原不锈钢针采血，600‑1500rpm离心，去除上清液，收集鲎血细胞；2)裂解：向步骤1)收集的鲎血细胞中加入裂解液重悬细胞，加入裂解液和鲎血细胞的体积比1∶2‑9∶10，‑20℃冷冻12小时以上，然后解冻，解冻后即得鲎血细胞溶解物；3)提取分离：向步骤2)制得的鲎血细胞溶解物中加入氯仿，加入氯仿与鲎血细胞溶解物的体积比1∶0.5‑1∶1，搅拌混合5‑20分钟，4℃，6000‑8000rpm下离心20‑30分钟，取上清液；4)制剂：向步骤3)制得的上清液中加入B、C因子抑制剂和多肽显色基质，使每毫升上清液中B、C因子抑制剂含量为0.5‑3mg，多肽显色基质0.5‑2mg，冰浴搅拌3‑5min；所述B、C因子抑制剂为对B、C因子特异性相对较高的丝氨酸蛋白抑制剂，所述多肽显色基质为Gly‑Arg末端连接PNA的合成三肽或四肽；5)真空冷冻干燥：将步骤4)得到的液体分装至西林瓶或安瓿瓶中，真空冷冻干燥，得到反应主剂；所述多肽显色基质为Boc‑Leu‑Gly‑Arg‑PNA或Boc‑Ile‑Gly‑Arg‑PNA；所述样本处理液的制备方法，采用无热源水配制0.05‑0.5mol/mL KOH和0.5‑2mol/mL KCl，使用时将已配制的两种溶液等体积混合即为样本处理液。