[发明专利]一种单细胞克隆培养方法

摘要

本发明公开了一种单细胞克隆培养方法，包括：步骤1，制备培养液微滴；步骤2，准备显微操作系统；步骤3，筛选单克隆细胞；步骤4，利用步骤2所述的显微操作系统将操作针内的目标细胞以每个液滴放一枚细胞逐一放入步骤1的培养液微滴内，然后进行细胞培养；步骤5，将步骤4培养的细胞在培养2天后进行半量换液；步骤6，扩大培养，获得单细胞克隆。利用本发明的方法，培养液微滴之间的石蜡油隔绝了微滴之间的接触，保证了细胞克隆的单一性；同时由于培养液微滴的体积为5μl以下，所培养细胞分泌的生物因子不被过度稀释，为细胞的生长提供了一个很好的微环境。

主权项

一种单细胞克隆培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1，制备培养液微滴：在培养皿的间隔位置逐一地加入第一体积的培养液，形成液滴；随后用石蜡油覆盖所述液滴，然后再向每个液滴内补入第二体积的培养液，形成培养液微滴；将其放入培养箱平衡，等待细胞的放入；步骤2，准备显微操作系统：利用拉针仪拉制出细胞操作针，并安装到显微操作仪上；步骤3，筛选单克隆细胞：将待筛选的细胞消化成单细胞悬液并放入细胞培养皿中，利用步骤2所述的显微操作系统根据筛选要求挑选目标细胞，将目标细胞逐一吸入显微操作针内；步骤4，利用步骤2所述的显微操作系统将操作针内的目标细胞以每个液滴培养一枚细胞逐一放入步骤1的培养液微滴内，然后进行细胞培养；步骤5，对步骤4中所培养细胞经过2天培养后，进行半量换液；步骤6，扩大培养：对步骤4中经过4～5天培养形成的细胞克隆进行消化处理，分别将每个培养液微滴中消化出的细胞移入96孔板进行培养，获得细胞数量更多的单细胞克隆。