[发明专利]一种利用三维诱导系统获得造血干细胞的方法

摘要

本发明提供一种利用三维诱导体系高效获得造血干细胞的方法，是利用三维细胞培养基质或细胞培养支架，如水凝胶、海藻等材料制成的三维细胞培养系统，和/或联合基质细胞如骨髓细胞、小鼠骨髓细胞系OP9、OP9DL1等，和/或联合多种因子包括中胚层诱导因子、造血生长因子等诱导多能干细胞分化为造血干细胞。本发明建立了一种新的获得造血干细胞的方法，首次建立了利用三维诱导体系和/或联合骨髓细胞等基质细胞和/或多种因子等高效诱导多能干细胞分化为造血干细胞的系统，为获得临床可用的造血干细胞提供了理论基础和技术平台，并为多能干细胞来源的造血细胞在疾病机理探索、药物筛选等领域的应用开拓了新的方法和新的思路。

主权项

一种利用三维诱导系统获得造血干细胞的方法，其特征在于，通过以下技术方案实现：利用三维诱导系统，根据细胞因子功能的不同，分阶段高效诱导多能干细胞分化获得造血干细胞，经过10‑14天的诱导和扩增，获得高于40%的造血干细胞，所述的多能干细胞包括人胚胎干细胞和诱导性多能干细胞, 所述的三维诱导系统选择多种三维细胞培养基质或细胞培养支架与诱导分化因子和生长因子，所述的多种三维细胞培养基质或细胞培养支架选择由水凝胶、海藻材料制成的三维细胞培养材料，其中在三维细胞培养基质或细胞培养支架中混合基质细胞，所述基质细胞选择人或者小鼠骨髓细胞、胎盘细胞、小鼠骨髓细胞系OP9、OP9‑DL1；所述的人胚胎干细胞选择从商业途径获得的人胚胎干细胞系；其中第一阶段选择的细胞因子为10ng/ml BMP4、100ng/ml SCF、100ng/ml Flt3L、 1ng/ml VEGF、20ng/ml TPO、2μM PGE2；第二阶段选择的细胞因子为造血因子和促进造血干细胞增值的细胞因子100ng/ml SCF、100ng/ml Flt3L、20ng/ml IL‑3、20ng/ml IL‑6、20ng/ml TPO、1ng/ml VEGF、2μM PGE2；第三阶段选择的细胞因子为促进造血细胞扩增和分化的细胞因子20ng/ml SCF、20ng/ml IL‑3、20ng/ml IL‑6、10ng/ml IL‑7、10ng/ml IL‑2、20ng/ml GM‑CSF、20ng/ml EPO、20ng/ml TPO。