[发明专利]中华鳖胚胎细胞组织块的原代培养方法有效
| 申请号： | 201410171766.6 | 申请日： | 2014-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN104059875A | 公开（公告）日： | 2014-09-24 |
| 发明（设计）人： | 曹铮;刘莉;林锋;叶雪平 | 申请（专利权）人： | 浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 313001 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种中华鳖胚胎细胞组织块的原代培养方法。本发明步骤为：（1）采集中华鳖的受精蛋，消毒；（2）破开受精蛋的蛋壳，将胚胎从蛋黄中剥离出来，将剥离出来的胚胎组织放在1×PBS缓冲液中清洗，然后浸泡灭菌；（3）将胚胎组织放入M199培养基中清洗4-5次，然后转移至完全培养基中并将胚胎组织剪碎得组织块，再将组织块用完全培养基清洗一次；（4）用无菌的一次性接种针均匀分散组织块于细胞瓶的内壁上，使组织块贴壁生长3-4小时，然后加入完全培养基浸没组织块，30-31℃恒温培养3天以上。本发明操作简单，培养方便，无需特定的细胞分离液，培养成功率高。 | ||
| 搜索关键词： | 中华 胚胎 细胞 组织 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种中华鳖胚胎细胞组织块的原代培养方法，其特征在于：所述原代培养方法包括以下步骤：（1）采集中华鳖的受精蛋，受精蛋表面用质量浓度70‑75%酒精喷洒消毒；（2）破开受精蛋的蛋壳，将胚胎从蛋黄中剥离出来，将剥离出来的胚胎组织放在1×PBS缓冲液中清洗，然后在质量浓度70‑75%酒精中第一次浸泡灭菌，接着在另一质量浓度70‑75%酒精中第二次浸泡灭菌；（3）将胚胎组织放入M199培养基中清洗4‑5次，然后转移至完全培养基中并将胚胎组织剪碎得组织块，再将组织块用完全培养基清洗一次；（4）用无菌的一次性接种针均匀分散组织块于细胞瓶的内壁上，使组织块贴壁生长3‑4小时，然后加入完全培养基浸没组织块，30‑31℃恒温培养3天以上。
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