[发明专利]一种提取UNG酶的方法

摘要

本发明提出了一种提取纯化UNG酶的方法。其步骤为取UNG酶工程菌进行活化后加入IPTG诱导表达得到表达的工程菌；用溶菌酶室温处理后加入DTT，吐温-20，冰上处理一段时间后离心，得到粗蛋白；缓慢加入二氧化硅颗粒，磁力搅拌器上搅拌，离心去除沉淀得到上清；将上清移至已经预热至70℃的水浴锅中，孵育后离心，去除沉淀，得到上清；上清流过已螯合Ni2+的Ni-NTA柱，再进行脱盐得到纯化的UNG酶；得到的M-MLV逆转录酶加入甘油使体积分数为50%，-20℃保存。本发明方法简单，酶活性损失小，回收蛋白的纯度、活性、回收量高。

主权项

一种提取纯化UNG酶的方法，其特征在于，包括如下步骤，1）工程菌的活化和表达：取UNG酶工程菌进行活化后并振荡培养后加入IPTG诱导；洗涤；离心收集菌体；收集的菌体用缓冲液A洗涤，离心；再用缓冲液A重悬得到表达的工程菌；2）粗蛋白制备：将所述表达的工程菌用溶菌酶室温处理后加入DTT，吐温‑20，冰上处理一段时间后离心，得到的上清即为粗蛋白；3）粗蛋白中缓慢加入二氧化硅颗粒，磁力搅拌器上搅拌，离心去除沉淀得到上清；4）将所述得到的上清移至已经预热至70℃的水浴锅中，孵育后离心，去除沉淀，得到上清；5）上清流过已螯合Ni2+的Ni‑NTA柱，再进行脱盐得到纯化的UNG酶；所述缓冲液A为20mM Tris‑HCl，0.2M NaCl，pH 8.0； 任选的，得到的M‑MLV逆转录酶加入甘油使体积分数为50%，‑20℃保存。