[发明专利]一种三磷酸腺苷的制备方法

摘要

本发明公开了一种三磷酸腺苷的制备方法。本发明主要是以二磷酸腺苷为原料，在葡萄糖、磷酸根离子、铵离子、镁离子等物质的条件下，利用啤酒酵母泥将二磷酸腺苷经生物发酵转化为三磷酸腺苷；再经活性炭、大孔吸附树脂、阴离子交换树脂等分离、纯化方法，得到三磷酸腺苷二钠盐。其生产工艺合适于工业化大生产，操作简便、安全，转化率高，在生物发酵过程中，降低有机溶剂的使用，减少了对环境的污染，低环保；另外本发明为三磷酸腺苷的生产提供了新途径。

主权项

一种三磷酸腺苷的制备方法，其特征是：以二磷酸腺苷为原料，在葡萄糖、磷酸根离子、铵离子、镁离子物质的条件下，利用啤酒酵母泥将二磷酸腺苷经生物发酵转化为三磷酸腺苷，具体制备步骤为：加入纯化水于反应釜中，加热，将葡萄糖、磷酸根离子、铵离子、镁离子加入反应釜中使其溶解，用氢氧化钠溶液调pH值至5.5‑8.5；向反应釜中加入啤酒酵母泥，缓慢升温，当温度达到30‑45℃时，加入二磷酸腺苷，此时开始取样测定三磷酸腺苷的转化率，当转化率达到95%以上时，立即用1‑6M的盐酸调节反应液pH至2.0‑5.0，终止反应；并开始进行压滤，当反应液压滤结束后，再用纯化水冲洗滤饼，将压滤液和水洗液混匀，获得含有三磷酸腺苷的发酵混合液；将上述含有三磷酸腺苷的发酵混合液上活性炭床柱进行除盐，以纯化水或pH=2的稀酸水溶液为冲洗液，以0.2‑0.8BV/h的流速去除残留在活性炭床柱的混合液，以20‑80%，pH7‑10的乙醇水溶液为洗脱液，以0.2‑0.8BV/h的流速进行等度洗脱，收集含有三磷酸腺苷的洗脱峰；将上述含有三磷酸腺苷的洗脱峰经减压浓缩得浓缩液，上大孔吸附树脂床柱进行脱色，以纯化水或pH=2的稀酸水溶液为冲洗液，以0.2‑0.8BV/h的流速去除残留在大孔吸附树脂床柱的混合液，收集含有三磷酸腺苷的冲洗液；将上述含有三磷酸腺苷的冲洗液上阴离子交换树脂床柱进行分离、纯化，以纯化水或pH=2的稀酸水溶液为冲洗液，以0.5‑1.5BV/h的流速去除残留在阴离子交换树脂床柱的混合液，洗脱液以0.5‑1.5BV/h的流速进行洗脱；先以含氯化钠或氯化钾的0.02‑0.08mol/L，pH1‑6的稀酸溶液Ⅰ进行洗脱，再以含氯化钠或氯化钾的0.5‑1.5mol/L，pH1‑6的稀酸溶液Ⅱ进行洗脱，收集含有三磷酸腺苷的冲洗液；将含有三磷酸腺苷的冲洗液进行纳滤，当纳滤浓缩的体积为纳滤前的1/4时，停止纳滤；将纳滤浓缩液放入醇沉罐中进行醇沉，醇沉浓度为85%，沉淀即为三磷酸腺苷固体。