[发明专利]用蜜蜂verm基因检测蜂王浆产量的方法无效
申请号: | 201410189863.8 | 申请日: | 2014-05-07 |
公开(公告)号: | CN103937902A | 公开(公告)日: | 2014-07-23 |
发明(设计)人: | 苏松坤;潘娇;陈盛禄 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人: | 邱启旺 |
地址: | 310058 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明涉及一种用蜜蜂verm基因检测蜂王浆产量的方法,包括蜜蜂样本采集、蜜蜂头部RNA提取、蜜蜂头部cDNA合成、引物设计、qRT-PCR反应体系和条件,以及蜂王浆产量性能鉴别。本发明从分子生物学高度,针对蜂王浆生产受蜂群群势、蜜源、环境、气候等条件影响巨大的问题,提供了能够更科学、准确地鉴别蜂群的王浆产量性能优劣的荧光定量PCR方法,可以大大缩短蜂王浆生产性状考察周期,加快蜜蜂育种速度,降低蜂王浆生产性状考察的成本和育种成本,还能减轻田间蜂王浆产量性能考察的工作强度。 | ||
搜索关键词: | 蜜蜂 verm 基因 检测 蜂王浆 产量 方法 | ||
【主权项】:
一种用蜜蜂verm基因检测蜂王浆产量的方法,其特征在于,鉴别方法如下: (1)蜜蜂取样:从被考察蜂群中,每群分别采集30只哺育蜂;所述哺育蜂指蜂群中哺育幼虫的工蜂,即6-12日龄的工蜂;(2) 蜜蜂头部RNA提取及cDNA合成:提取所采集哺育蜂头部的RNA,反转录获得cDNA;(3)引物设计:设计合成引物Primer‑F和 Primer‑R,Primer‑F的序列如SEQ ID NO.3所示,Primer‑R 的序列如SEQ ID NO.4所示;(4)荧光定量PCR检测:以稀释后的蜜蜂头部cDNA为模板, 以Primer‑F和 Primer‑R为引物,进行荧光定量PCR;选用蜜蜂头部的GAPDH为内参基因,采用2‑△△ct 方法计算蜜蜂verm基因的表达量;在每个蜂群样本的每次qRT‑PCR反应中均重复多次,取多次重复的平均值为蜜蜂verm基因的最终表达量,最终表达量越高,则該蜂群的蜂王浆产量性能越好;所述2‑△△ct为蜜蜂verm基因的相对表达量,其中△△Ct = (Cttarget‑CtGAPDH) treatment ‑ (Cttarget‑CtGAPDH) control。
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