[发明专利]荜茇及胡椒中的五种生物碱的鉴定及含量同步测定方法

摘要

本发明公开了一种荜茇及胡椒中的5种生物碱的鉴定及含量同步测定方法。该方法采用HPLC-ESI-IT-MS/MS法对5种生物碱的结构进行了鉴定，并且首次建立了一种快速、准确的UFLC-ESI-MS/MS法同时测定5种生物碱含量的方法。5种生物碱的线性相关系数R²>0.955，最低检测限为0.02-0.03ng/mL，最低定量限为0.05-0.10ng/mL。5种生物碱含量测定方法日内精密度RSD值小于9.30％，日间精密度小于9.55％。该方法的稳定性、重复性、加样回收率均符合要求，方法学考察结果表明该方法具有良好的适用性。

主权项

一种从荜茇和/或胡椒中分离生物碱的方法，包括如下步骤：将待测样品进行液相色谱‑串联质谱检测，根据洗脱峰保留时间、Q₁和Q₃特征分离各个洗脱峰，即得到各个生物碱；所述Q₁为分子离子峰[M+H]⁺的质量，Q₃为二级碎片子离子的质量；所述待测样品为荜茇和/或胡椒；所述生物碱选自胡椒碱、荜茇明宁碱、二氢荜茇明宁碱、胡椒新碱和墙草碱中的至少一种；所述液相色谱检测的条件如下：所用色谱柱为Phenomenex Gemini C18反相色谱柱；洗脱液由流动相A和流动相B组成；其中，流动相A为质量百分浓度为0.1％的甲酸水溶液；流动相B为由甲酸和乙腈组成的混合液，甲酸的质量百分浓度为0.1％；洗脱方式为梯度洗脱，洗脱速度为0.55mL/min；所述梯度洗脱方式如下：第0分钟起至第0.49分钟末，洗脱液中流动相A与流动相B的体积比为98：2；第0.50分钟起至第3.00分钟末，洗脱液中流动相A与流动相B的体积比为98‑2：2‑98；第3.10分钟起至第3.99分钟末，洗脱液中流动相A与流动相B的体积比为2：98；第4.00分钟起至第4.00分钟末，洗脱液中流动相A与流动相B的体积比为98‑2：2‑98；第4.01分钟起至5.49分钟末，洗脱液中流动相A与流动相B的体积比为98：2；第5.50分钟起，停止洗脱；所述根据洗脱峰保留时间、Q₁和Q₃特征分离各个洗脱峰的方法如下：保留时间为3.78分钟、Q₁为258.9和Q₃为201.1的洗脱峰即为胡椒碱；保留时间为3.73分钟、Q₁为273.9和Q₃为201.1的洗脱峰即为荜茇明宁碱；保留时间为3.71分钟、Q₁为276.1和Q₃为134.9的洗脱峰即为二氢荜茇明宁碱；保留时间为3.76分钟、Q₁为288.0和Q₃为135.1的洗脱峰即为胡椒新碱；保留时间为3.93分钟、Q₁为224.0和Q₃为80.9的洗脱峰即为墙草碱。