[发明专利]表达hTERT基因的重组非增殖型腺病毒及应用

摘要

本发明提供一种表达hTERT基因的重组非增殖型腺病毒。是从质粒pIRES2-EGFP-hTERT中酶切获得目的基因hTERT，插入pSG218穿梭载体中巨细胞病毒启动子的下游，得到携带hTERT基因的重组穿梭载体，再将该重组穿梭载体与病毒骨架载体pPE3-F11B共转染至人胚肾293细胞，得到携带hTERT的非增殖型腺病毒。用该重组腺病毒感染人类多发性骨髓瘤细胞，可以使细胞过度表达hTERT基因，增强细胞对表阿霉素的耐药。本发明的主要用途是建立过表达hTERT基因的多发性骨髓瘤细胞株模型，并在此模型上进一步研究hTERT基因参与多发性骨髓瘤细胞耐药的机制。

主权项

一种表达hTERT基因的重组非增殖型腺病毒，其特征在于，通过以下步骤获得：先用内切酶EcoR I从质粒pIRES2‑EGFP‑hTERT中酶切获得SEQ ID NO.1的目的基因hTERT，插入质粒pSG218中巨细胞病毒启动子的下游的EcoR I酶切位点，得到携带hTERT基因的重组腺病毒质粒pDC318‑hTERT，再将该重组腺病毒载体与病毒骨架载体pPE3‑F11B用脂质体介导法共转染至人胚肾293细胞，得到携带hTERT的重组非增殖型腺病毒VDC318‑hTERT，其中hTERT基因插入pSG218后，转化的细菌为E. coli DH5α，随后在该细菌内重组、扩增。