[发明专利]一种利用酿酒酵母二酪氨酸层疏松型孢子固定化酶的方法

摘要

本发明公开了一种利用酿酒酵母二酪氨酸层疏松型孢子固定化酶的方法，属于微生物和固定化酶技术领域。本发明将带有自身信号肽的α-半乳糖苷酶基因插入到质粒pRS424-TEFpr上，得到重组质粒pRS424-TEF_pr-MEL1，然后转化OSW2基因缺陷型酿酒酵母，通过以醋酸盐为唯一或主要碳源，并辅以缺乏氮源的条件培养重组酵母，最终收集纯化获得固定化酶。该微胶囊固定化酶一方面可以利用二酪氨酸层将酶包裹在孢子的周质间隙上，同时二酪氨酸层变得疏松后便于底物分子与酶分子进行接触，提高了反应效率。这种独特的空间定位提高了对蛋白酶的稳定性、无需蛋白纯化和固定化操作、降低生产成本等。

主权项

一种利用酿酒酵母二酪氨酸层疏松型孢子固定化酶的方法，其特征在于，构建OSW2基因缺陷型酿酒酵母，以其为宿主，构建表达目的酶的重组酿酒酵母，培养重组酿酒酵母使其以孢子生殖的方式进行繁殖，在胞内形成孢子，目的酶表达定位在酿酒酵母孢子的壳聚糖层和二酪氨酸层之间的周质间隙，收集孢子获得固定化酶。