[发明专利]用于微污染河流原位修复的微生物复合固定化颗粒的制备方法

摘要

本发明涉及用于微污染河流原位修复的微生物复合固定化颗粒的制备方法，可有效解决将固定化微生物技术应用于修复微污染河流水体的问题，其解决的技术方案是，包括以下步骤：a．载体材料筛分与改性；b．细菌斜面培养；c．细菌菌液制备；d．生物基质制备；e．包埋剂与交联剂制备；f．微生物复合固定化颗粒制备；g．扩增培养；本发明材料丰富，成本低廉，环境友好对生物无毒性，不会造成二次污染，不会造成基质床堵塞，是修复微污染河流水体方法上的创新。

主权项

一种用于微污染河流原位修复的微生物复合固定化颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a．载体材料筛分与改性：先将载体材料玉米芯粉碎成粒径为0.3～1.6mm的颗粒，然后浸泡在浓度为1mol/L的磷酸溶液中进行改性，再用蒸馏水冲洗干净，蒸汽灭菌，干燥，得改性载体材料；b．细菌斜面培养：在基础培养基中接入菌种，接种量为0.01‑0.5%，在30±1℃温度时，置于生化培养箱中斜面培养30小时；所述的基础培养基由以下重量百分比计的：牛肉膏0.3%、蛋白胨0.5%、NaCl 0.5%、琼脂1.5～2.0%和pH 7.0～7.5的蒸馏水96.7～97.2%制成；所述的菌种为Paracoccus pantotrophus、Bacillus subtilis、Photosynthetic bacteria、Psdeuomnoda fluoerncnet的一种或两种以上的混合；c．细菌菌液制备：用接种环在上述基础培养基上挑取菌种，接入到选择性培养基，接种量为0.01‑0.5%，放入摇床温度30±1℃、转速150r/min下培养30小时，得细菌菌液，所述的细菌菌液的密度为10⁵～10⁷个/mL；所述的选择性培养基由以下重量百分比计的：(NH₄)₂SO₄ 0.05% 、琥珀酸钠0.595 %、维氏盐溶液5%和 pH为7.5～8.0的蒸馏水94.355%制成，维氏盐溶液的组分重量百分比为：K₂HPO₄ 0.5% 、MgSO₄·7H₂O 0.25%、NaCl 0.25%、FeSO₄·7H₂O 0.005%、MnSO₄·4H₂O 0.005 %、蒸馏水98.99%；d．生物基质制备：将细菌菌液与改性载体材料按重量比100：3~15的比例混合，在30±1℃、150r/min条件下培养，定期检测培养液污染物变化，污染物稳定时取出改性载体材料，用无菌生理盐水清洗干净，添加至新的细菌菌液中，连续培养三个周期，使微生物在载体表面和内部增殖得到生物基质；e．包埋剂与交联剂制备：包埋剂由重量百分计的：海藻酸钠2%、聚乙烯醇8%和蒸馏水90%制成，其中，先将海藻酸钠和聚乙烯醇混合，加入到蒸馏水中，加热溶解，灭菌，冷却至室温，得包埋剂；交联剂由重量百分计的：氯化钙2%和饱和硼酸溶液98%制成；f．微生物复合固定化颗粒制备：将上述生物基质与包埋剂混匀后滴加入交联剂中，使其形成粒状小球，反应 24小时，用无菌生理盐水冲洗，得3～4mm的微生物复合固定化颗粒，于4℃无菌生理盐水中保存备用；g．扩增培养：将上述微生物复合固定化颗粒取出接入扩增培养基中，接种量为0.01‑0.5%，放入摇床温度30±1℃、转速150r/min下培养30小时，然后重复扩增培养步骤即可；所述扩增培养基由以下重量百分比计的：葡萄糖4.0%、酵母膏0.3%、KH₂PO₄ 0.05%、MgSO₄·7H₂O 0.025%、(NH₄)₂HPO₄ 0.2%和pH 7.0～7.5的蒸馏水95.425%制成。