[发明专利]一种高效液相色谱法测定艾塞那肽及其杂质的方法

摘要

本发明提供一种高效液相色谱法测定艾塞那肽及其杂质的方法，通过高效液相色谱法测定艾塞那肽及其杂质，各杂质的专属性、线性及范围、回收率、精密度、耐用性等试验均良好；通过本发明方法使分离的已结构确证的杂质达到8个。本发明方法设计合理，仪器设备为已普及的高效液相色谱仪；且流动相配制简单、检测成本低，实现艾塞那肽及其杂质的分离并定量测定。

主权项

一种高效液相色谱法测定艾塞那肽及其杂质的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）色谱柱的准备:所用色谱柱的填充剂为用辛烷基硅烷；（2）高效液相色谱仪的设置：检测器的检测波长为214nm，自动进样器温度为6℃，柱温为40℃，流动相流速为0.8~1.2ml/min；（3）色谱流动相水相的配置：称取烷基磺酸钠，用水溶解并稀释成浓度总和为1.2~1.8mmol/L溶液，并用磷酸调pH至4.0~4.8；（4）流动相的准备：流动相A为乙腈‑上述烷基磺酸钠溶液=10:90 ，流动相B为乙腈‑烷基磺酸钠溶液=52:48；（5）梯度洗脱：洗脱时间及流动相A体积比顺序为0.01～60 min从60％→25％、60～60.5min 再从25％→60％、60％运行至65min；（6）样品溶液的配置：称取样品，用流动相溶解并稀释至含艾塞那肽0.4~1.6mg/ml溶液；（7）精密吸取样品溶液40μl，注入液相色谱仪测定，并记录色谱图，艾塞那肽的保留时间为26.272min，各杂质的相对保留时间分别为：Exenatide fragment3‑39：0.33，Acetyl Exenatide：0.42，L‑Glu¹³ Exenatide：0.46，D‑Ser⁸ Exenatide：0.50，D‑Ser¹¹ Exenatide：0.88，Met[O] Exenatide：0.95，D‑His¹ Exenatide：1.08，Des‑Gly² Exenatide：1.12。