[发明专利]一种甾体生物碱含量的测定方法

摘要

本发明涉及一种甾体生物碱含量的测定方法，包括以下步骤：(1)生物碱的提取与制备；(2)称取步骤(1)中制备的样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用；(3)高效液相色谱分析测定峰面值(4)标准曲线的建立：高效液相色谱分析法测定各浓度对照品的吸光度，对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程；(5)甾体生物碱含量的测定：根据步骤(3)中测得的峰面值和步骤(4)中的回归方程y＝1185050.6095x-37397.6623计算出样品的甾体生物碱含量。本发明利用超声技术，溶剂使用量相对较少，降低成本，利用旋转蒸发器减压蒸馏溶剂，借助于真空泵降低系统内压力，降低液体的沸点，较低温度下得到生物碱浓缩液。

主权项

一种甾体生物碱含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)生物碱的提取与制备：将待测器官洗净37℃下烘干，并粉碎至40目，准确称取1.0g，置于超声波清洗器中用50m195％乙醇水溶液超声提取30min，以同样的方法超声提取第二次，经过滤渣弃去，合并二次滤液，利用旋转蒸发器减压蒸馏浓缩，挥发回收乙醇，得浓缩液，浓缩液溶于稀酸溶液至pH值为3，过滤，滤液加氨水至pH值为10，过滤，得清夜，置冰箱中备用；(2)精密称取步骤(1)中制备的样品，减压蒸馏浓缩挥发回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱静置一定的时间备用；(3)高效液相色谱分析测定峰面值：所述的液相色谱条件如下：色谱柱：Cosmosil5C18AR‑II(250×4.6mm)；流动相：乙腈—磷酸二氢钾(75：25)；检测波长：205nm；流速：1.0mL/min；进样量10μL，柱温:25℃；(4)标准曲线的建立：精密吸取对照品0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg用冰乙酸定容至5mL，在20℃静置一定的时间备用，以步骤(3)中的液相条件，高效液相色谱分析法测定各浓度对照品的吸光度，对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程：y＝1185050.6095x‑37397.6623，其中y为吸光度，x为样品含量，其中相关系数r＝0.9960，r为样品含量与吸光度二组数据间的相关性，与朗伯·比尔定律相符；(5)甾体生物碱含量的测定：根据步骤(3)中测得的峰面值和步骤(4)中的回归方程y＝1185050.6095x‑37397.6623，其中y为峰面值，x为样品碱含量，计算出样品的甾体生物碱含量。