[发明专利]一种大黄鱼鱼鳔降压肽及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种大黄鱼鱼鳔降压肽及其制备方法和用途，该降压肽的氨基酸序列为Leu‑Arg‑Pro‑Ile（SEQ ID No1），ESI‑MS检测给出分子量为497.65 Da（[M+H]+ 498.48 Da）。制备时蒸馏水洗净大黄鱼鱼鳔，用高速组织捣碎机匀浆，用Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲液抽提，硫酸铵分级沉淀得粗蛋白；粗蛋白经胰蛋白酶和碱性蛋白酶依次酶解，酶解物经离心、超滤和色谱精制，得到降压肽。本发明降压肽的制备工艺科学合理，双酶酶解过程易于控制，制备的降压肽对血管紧张素转化酶（ACE）具有显著的抑制作用，且具有易于消化吸收和安全无毒副作用等优点，可用作药物和保健食品。

主权项

一种大黄鱼鱼鳔蛋白降压肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）大黄鱼鱼鳔洗净、破碎匀浆，按料液比1g:8～10 ml的比例加入浓度0.2mol/L，pH 7.0的NaH2PO4‑Na2HPO4缓冲液，于 0～4 ℃下振荡抽提24～48 h，以8000～12000rpm的转速离心15～25 min，得上清液；上清液中加入硫酸铵，使硫酸铵浓度达到30%，静置1～3 h后，以8000～12000rpm的转速离心15～25 min，去除沉淀物，上清液中继续加入硫酸铵，使其浓度达到60%，静置1～3 h后，以8000～12000rpm的转速离心15～25 min，得沉淀物，并置于透析袋中用蒸馏水透析18～24 h，透析液冷冻干燥，得鱼鳔粗蛋白；2）取鱼鳔粗蛋白，按照料液比1 g:15~20 mL加入双蒸水，调节pH 值至7.5~8.0，于35~40℃保温10~15 min；按照鱼鳔湿重的1.0~1.5%加入第一种蛋白酶，于35~40℃温度下酶解3~5 h；酶解液调pH 值至9.0~10.0，于40~50℃保温10~15 min；按照鱼鳔湿重的1.0~1.5%加入第二种蛋白酶，于40~50℃温度下酶解2~4 h；3）将酶解液加热到90~95℃灭活10~15 min，4500~5000 rpm离心15~20 min，取上清液；上清液依次经超滤和层析，得到降压肽；该降压肽的氨基酸序列为Leu‑Arg‑Pro‑Ile（SEQ ID No：1），分子量为497.65 Da；所述步骤2）中的第一种蛋白酶为胰蛋白酶，酶活力≥1.85×105 U/g；所述步骤2）中的第二种蛋白酶为碱性蛋白酶，酶活力≥1.90×105 U/g。