[发明专利]一种纯化尿激酶的方法有效
| 申请号： | 201410222057.6 | 申请日： | 2014-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN104031901A | 公开（公告）日： | 2014-09-10 |
| 发明（设计）人： | 郭国岭;扈会平;徐晓;曹延琴;王伟梅;邱伟 | 申请（专利权）人： | 丽珠集团丽珠制药厂 |
| 主分类号： | C12N9/72 | 分类号： | C12N9/72 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 519000 广东省珠海*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种纯化尿激酶的方法。本发明将尿激酶粗品中2个主要分子量区域的蛋白分开处理，通过调节pH值等手段进一步去除粗品中的杂质、热源和细胞内毒素，得到了尿激酶精品。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 纯化 尿激酶 方法 | ||
【主权项】：
一种能够从尿激酶粗品中纯化尿激酶，同时去除病毒及热原的尿激酶制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)粗品提取：取尿激酶粗品，加正丁酸铵/乙醇/磷酸盐溶液进行溶解，尿激酶粗品与pH6.0正丁酸铵/乙醇/磷酸盐溶液的比例为：1g∶2‑6ml；搅拌；过滤，将滤饼再加正丁酸铵/乙醇/磷酸盐溶液进行溶解，滤饼与正丁酸铵/乙醇/磷酸盐溶液按的比例为：1g∶2～5ml；搅拌，过滤；合并两次的滤液，调节滤液pH至6.0；正丁酸铵/乙醇/磷酸盐溶液的配制：将180g正丁酸铵溶解于1000ml70％乙醇溶液中，得18％正丁酸铵/乙醇溶液；将18％正丁酸铵/乙醇溶液与pH值6.0的磷酸缓冲溶液等体积混合，即得；(2)30，000道尔顿超滤膜预处理：用碱处理，1mol/l的氢氧化钠溶液循环35分钟，静置15小时，用pH6.0磷酸缓冲液洗净；20，000道尔顿超滤膜预处理：用碱处理，1mol/l的氢氧化钠溶液循环35分钟，静置15小时，用pH6.0磷酸缓冲液洗净。(3)超滤：将粗提液用30，000道尔顿超滤膜进行超滤，超滤至原体积的1/5至1/20，分别收集浓缩液和滤液；(4)浓缩液处理：浓缩液加苯甲酸钠2％溶液至原体积后，继续超滤至原体积的1/5至1/15。收集浓缩液，然后缓慢加入0.1～0.3mol/L磷酸钠溶液，搅拌，最后加入0.1～0.5mol/L硫酸铜溶液，调节pH值至5.0‑5.5，用乙醇进行沉淀。沉淀用pH7.0磷酸缓冲液溶解，加入缓冲液的比例为1g∶10ml，搅拌，调节pH值至5.0‑5.5，用乙醇进行沉淀；(5)滤液处理：滤液，然后缓慢加入0.1～0.3mol/L磷酸钠溶液，搅拌，最后加入0.1～0.5mol/L醋酸钙溶液，用氨水调节pH值至10.0‑10.5，用乙醇进行沉淀。沉淀用水溶解，加入水的比例为1g∶10ml，搅拌，调节pH值至10.0‑10.5，用乙醇进行沉淀；(6)浓缩液沉淀和滤液沉淀：将步骤(4)和(5)的沉淀溶于pH6.0磷酸缓冲液，用20，000道尔顿超滤膜过滤，至原体积的1/5至1/20；加水至原体积后，继续超滤至原体积的1/5，反复2‑3次，浓缩液加入乙醇进行沉淀，浓缩液与加入乙醇的体积比为：1∶4～6，离心。再用乙醇洗涤沉淀物，离心，反复2～4次；然后沉淀物干燥，得尿激酶精品。
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