[发明专利]一种人类嗅黏膜间充质干细胞的分离培养方法

摘要

本发明提供了一种人类嗅粘膜间充质干细胞的分离培养方法。包括以下步骤：1、配制由DMEM和F12以1∶1混合而成的基础培养液；2、即时采集病员AS；3、将采集的AS加入配制出的人嗅粘膜间充质干细胞培养基中，在35℃～38℃、加3～7％的CO2。本发明可以高效快速的获得高纯度的嗅粘膜间充质干细胞，这群细胞具有较强的克隆形成能力、自我更新能力和多向分化潜能，本发明方法获得的嗅粘膜细胞具有较强的成脂能力、成骨能力、成神经干细胞能力和成神经元的能力，为在体外获取大量的具有干细胞运用于细胞和组织再生提供了新的方法。

主权项

1.一种人类嗅黏膜间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于按照以下步骤进行：步骤1：配制人嗅黏膜间充质干细胞基础培养基；步骤2：采集AS，其中AS是指autologous serum；步骤3：将AS加入到人嗅黏膜间充质干细胞基础培养基；步骤4：鼻黏膜放入培养皿中，用青霉素与生理盐水配比1∶1清洗3遍，清洗残余血迹；步骤5：在培养皿中用无菌剪刀将步骤中洗浄的嗅黏膜剪成面积为1mm3组织块；步骤6：将组织块置于离心管中与培养基充分混合振荡种植于细胞培养瓶中，并置于37℃，5％CO2培养箱中培养；步骤7：细胞爬出之后换液，之后每隔3天更换一次培养基，继续培养；所述步骤1中配制人嗅黏膜间充质干细胞基础培养基的步骤为：a：取DMEM和F12按1∶1混合而成的培养粉末，加纯净水至浓度为10～25g/L，并充分搅拌溶解，制得细胞的一般基础培养液，b：以1～10当量浓度的氢氧化钠调pH为7.0～7.5，c：层流细胞培养室抽滤消毒，4℃储存备用。