[发明专利]一种重组人白细胞介素-2发酵包涵体的提取方法

摘要

本发明公开了一种重组人白细胞介素-2发酵包涵体的提取方法，包括以下步骤：(1)对大肠杆菌表达重组人白介素-2的工程菌株进行培养；(2)对发酵培养所得菌体进行破菌收集包涵体；(3)对包涵体进行提取和洗涤，得到精制包涵体，所述工程菌株为E.Coli K802(ply-4)，培养方法包括扩增培养和发酵罐培养，均采用含酵母和蛋白胨的无抗生素培养基，采用高压均质机破菌，经过变性，得到高纯度ril-2原液。本发明的生产方法生产周期短，生产效率高，生产规模大，特别适于工业化生产，降低了生产成本。

主权项

一种重组人白细胞介素‑2发酵包涵体的提取方法，依次包括以下步骤：(1)对大肠杆菌表达重组人白介素‑2的工程菌株进行培养；(2)对发酵培养所得菌体进行破菌收集包涵体；(3)对包涵体进行提取和洗涤，得到精制包涵体，其特征在于：所述大肠杆菌表达重组人白介素‑2的工程菌株为E.Coli K802(ply‑4)，培养方法包括扩增培养和发酵罐培养，其中扩增培养包括以下子步骤：a.菌种复苏：将工程菌株进行菌种复苏，将种子液接种到液体LB培养基中培养，设定摇床温度为28℃，150r/min，培养10‑11小时；b.一级种子液培养：将复苏后的种子液接种到含液体LB培养基的摇瓶中培养，设定摇床温度为30℃，150r/min，培养8‑9小时；c.二级种子液培养：将一级种子液按增加1％的体积比方式接种到含30L液体LB的贝朗50L发酵罐中，罐培养控制条件为：转速100‑300rpm/min，通气50L/min，罐压0.1‑0.2bar，温度32℃，溶氧不低于50％，培养3‑5小时，至OD600值至为1.0‑2.0时结束培养，取样镜检观察无杂菌，菌种形态正常，即为发酵罐培养用种子；所述发酵罐培养包括如下子步骤：a.发酵前的准备：采用贝朗公司500L发酵罐，将发酵培养基浓缩液接入发酵罐并定容至500L，设定灭菌温度120℃，25min，发酵罐自动在线灭菌；b.发酵罐培养：灭菌后，待培养基温度降到25℃时，将种子罐中二级种子液通过管道接种到500L发酵罐中，发酵罐培养控制条件为：培养温度从25℃逐渐升温至30℃，升温速率为5℃/h，在30℃下培养1.5小时后，于1小时内匀速逐渐升温至33℃，并在33℃下培养1小时后开始诱导表达；发酵培养过程通过调节转速、通气量及罐压等将溶氧控制在30％以上，各参数调节范围为：转速200—450r/min、通气量100‑400L/min、罐压0.1‑0.3bar；c.诱导发酵：诱导温度为42℃，诱导3.5小时，结束发酵，经离心收集发酵产物。