[发明专利]一种含amiRNA-HIF-1α序列的重组质粒的制备方法及用途

摘要

本发明公开了一种含amiRNA-HIF-1α序列的重组质粒的制备方法及用途，该重组质粒的制备方法包含amiRNA-HIF-1α序列的合成、目的片段和载体质粒的连接、连接产物转化大肠杆菌感受态细胞以及重组质粒电泳鉴定并测序等步骤。该重组质粒包含amiRNA-HIF-1α的编码序列以及载体质粒DNA序列，载体质粒DNA序列中包含与amiRNA-HIF-1α连接的调节序列。本发明还公开了该重组质粒用于制备抗肿瘤药物的用途。本发明可用于amiRNA-HIF-1α在肿瘤血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用机理的研究，以及抗肿瘤药物的开发和生产，从而提供预防和治疗恶性肿瘤的新途径。

主权项

一种含amiRNA‑HIF‑1α序列的重组质粒的制备方法，其特征在于，其特征在于，所述的方法包含：步骤1，根据HIF‑1α CDS序列设计并合成siRNA序列，并进行5’端2‑甲氧基修饰，再通过细胞转染实验验证其有效性；步骤2，设计并合成包含HIF‑1α siRNA序列的DNA序列amiRNA‑HIF‑1α；步骤 3，对所得amiRNA‑HIF‑1α序列和载体质粒用连接酶进行连接，得到的连接产物即为所述的含amiRNA‑HIF‑1α的重组质粒；步骤4，用步骤3所得连接产物转化大肠杆菌感受态细胞并进行培养；步骤5，从步骤4培养所得的菌落中任意挑取一个进行质粒提取，然后通过电泳鉴定；步骤6，通过细胞实验验证所得重组质粒的抗肿瘤作用。