[发明专利]乳腺癌21基因联合检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了乳腺癌21基因联合检测的试剂盒，本发明的PCR扩增引物由包括21对引物对所组成，可以联合检测21个基因相关表达量：Ki67,STK15,Survivin,CCNB1,MYBL2,MMP11,CTSL2,GRB7,HER2,GSTM1,CD68,BAG1,ER,PGR,BCL2,SCUBE2,ACTB,GAPDH,PRLPO,GUS,TFRC。本发明所涉及的21对引物产出片段都小于100bp，大大提高了石蜡标本提取mRNA逆转录后PCR的效率；预混了21基因的所有引物，省去了实验者设计和合成21对基因的时间和精力；无需再添加21基因的相应引物，预混在母液中大大减小了反应孔的误差。本试剂盒操作简单，只需加入模板就能在定量PCR仪上检测，大大缩短了检测实验时间。本发明适用于单样品和多样品，都能快速得到结果，能很好的满足科研和临床检测需求。

主权项

一种乳腺癌21基因联合检测试剂盒，其特征是21个基因为Ki67, STK15, Survivin, CCNB1, MYBL2, MMP11, CTSL2, GRB7, HER2, GSTM1, CD68, BAG1, ER, PGR, BCL2, SCUBE2, ACTB, GAPDH, PRLPO, GUS, TFRC；所述试剂盒包括以下扩增21个基因的引物对：引物对1：Ki‑67：F: 5'  CTCCACAGTCAGACCCAG  3'      R: 5'  GCACGCTAAGAGTTCTCC  3'；引物对2：STK15：F: 5'  AGGCTCAGCGGGTCTTGT  3'      R: 5'  AACCGGCTTGTGACTGGA  3'；引物对3：Survivin：F: 5'  TACGCCTGTAATACCAGCAC  3'   R: 5'  AAGCGCAACCGGACGAAT  3'；引物对4：Cyclin B1：F; 5'  CGGGAAGTCACTGGAAAC  3'     R: 5'  CTCCTGCAACAACCTGAA  3'；引物对5：MYBL2：F: 5'  AGGGAGGACAGACAATGCT  3'   R: 5'  CTTTGGACTCGCTCAAGAA  3'；引物对6：MMP11： F: 5'  GGTGGCAGCCCATGAATT  3' R: 5'  GGTAGCGAAAGGTGTAGAAGG  3'；引物对7： CTSL2：F: 5'  TACAGCCAAGGGAAACAT  3'    R: 5'  GAAAGCAACCCATCATCT  3'；引物对8：GRB7：F: 5'  CCCACTGACTTCGGTTTCT  3'     R: 5'  GTGCGGCTCTGCTCATCT  3'；引物对9：HER2：F: 5'  GAGTCCATGCCCAATCCC  3'     R: 5'  CCCACGTCCGTAGAAAGGT  3'；引物对10：ER：F: 5'  TGCCAAGGAGACTCGCTAC  3'   R: 5'  AGCCCTCACAGGACCAGA  3；引物对11：PGR：F: 5'  GCTGCGGTGGAGGTTGAGGA  3' R: 5'  ACCCAGAGCCCGAGGTTTGC  3'；引物对12：BCL2,：F: 5'  CTTCGCCGAGATGTCCAG  3'    R: 5'  CCAGTTCACCCCGTCCCT  3'；引物对13：SCUBE2：F: 5'  ATGGGAGGAGCTGCCTTGA  3'  R: 5'  CGCCGTTTCACCCGTTTA  3'；引物对14：GSTM1：F: 5'  GACGCTCCTGATTATGACA  3'   R: 5'  TCAAGTAGGGCAGATTGG  3'；引物对15：BAG1：F: 5'  ATCTTGGAGGAGATTGACA  3'   R: 5'  AGGAATGCCTGAACCTTT  3'；引物对16：CD68：F: 5'  CTTTGCTGCCATCCTTCA  3'     R: 5'  TTGTGGCTCTTGGTAGTCC  3'；引物对17：ACTB：F: 5'  TTCCAGCCTTCCTTCCTG  3'     R: 5'  CTTTGCGGATGTCCACGT  3'；引物对18：GAPDH：F: 5'  ATCATCAGCAATGCCTCC  3'    R: 5'  TCCTTCCACGATACCAAAG  3'；引物对19：PRLPO：F: 5'  GGTCATCCAGCAGGTGTT  3'    R: 5'  CCTCCAGGAAGCGAGAAT  3'；引物对20：GUS：F: 5'  CCACGGTGTCAACAAGCA  3'   R: 5'  ACCAAGCCAGCGAAGCAG  3'；引物对21：TFRC：F: 5'  CACCATCTCGGTCATCAG  3'    R: 5'  TCCATATTCCCAAACAGC  3'。