[发明专利]一种GPx7重组蛋白的制备方法有效
| 申请号： | 201410238229.9 | 申请日： | 2014-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN104004722B | 公开（公告）日： | 2017-10-27 |
| 发明（设计）人： | 孙永宪;陈欣麟;毛文伟;杜伟业;孙文立 | 申请（专利权）人： | 上海御先医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08;C12N15/70 |
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| 地址： | 200000 上海市青*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种重组GPx7的制备方法。本发明公开了一种GPx7重组蛋白的制备方法，包括下列步骤构建GPx7重组蛋白原核表达质粒和菌株；GPx7重组蛋白的表达；GPx7重组蛋白的抽提；GPx7重组蛋白的纯化。本发明所述制备方法步骤简单，费用低廉，纯化程度高，所制备蛋白活性良好，远优于现有技术中所采用的金属亲和层析法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 gpx7 重组 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种GPx7重组蛋白的制备方法，包括下列步骤：a)构建GPx7重组蛋白原核表达质粒和菌株；b)GPx7重组蛋白的表达；c)GPx7重组蛋白的抽提；d)GPx7重组蛋白的纯化；其中所述GPx7重组蛋白的表达为含GPx7重组蛋白原核表达质粒的菌株经培养诱导表达GPx7重组蛋白；所述GPx7重组蛋白的抽提为菌液经超声破碎离心保留上清，上清即为蛋白抽提液；上清用滤膜进行过滤，过滤液加入终浓度为1‑2mM EDTA和5‑10mM DTT；所述GPx7重组蛋白的纯化为步骤c中过滤液经过阳离子交换层析和分子排阻层析纯化，即获得GPx7重组蛋白；所用阳离子交换层析柱为磺丙基阳离子交换层析柱，分子排阻层析柱为葡聚糖凝胶75层析柱。
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