[发明专利]一种微生物厌氧降解染料的高通量无损检测方法

摘要

本发明提出了一种微生物厌氧降解染料的高通量无损检测方法，属于污染物降解和分子生物学领域。在96孔板的每个孔中加入染料污染物与菌体的混合物，以液体石蜡液密封后，在氮气氛围中加盖高透光率透明胶带密封，形成厌氧反应体系，以全波长酶标仪在特定波长下检测染料的吸光值，进行定时无损监测。这种新型高通量评估体系方法新颖，能够显著提高评估效率，避免取样过程，减小实验误差，缩短评估时间，且准确率高，重复性好，反应条件易于控制，在污染物降解及产电微生物产电能力的评估等领域具有很强的实际应用价值。

主权项

微生物厌氧降解的高通量无损检测方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）挑取待测微生物单克隆，接入50 ml酵母膏蛋白胨液体培养基，在好氧条件下于30 ^oC，180 rpm震荡培养至对数后期；（2）采用6000 ×g，5 min离心收集菌体，之后用无菌蒸馏水重悬洗涤两次；（3）将步骤（2）离心重悬好的菌体密度调节到4~5×10⁸ CFU/ml备用；（4）将干净的96孔板置于超净台中，紫外灭菌两小时，备用；（5）配制含有染料污染物的脱色培养基，并通入高纯氮气除氧；（6）在无氧氛围中，将步骤（5）所配含有染料污染物的培养基添加到步骤（4）处理好的96孔板，每孔加入80 μl培养基；（7）再添加步骤（3）所调好菌浓的菌悬液60 μl于培养基中，在酶标仪上震荡混匀；（8）再向步骤（7）体系中加入60 μL液体石蜡，以防止液体蒸腾并在一定程度上隔绝空气；（9）加样完成后在无氧氛围中用高透光率透明胶带密封，确保反应体系能隔绝空气，形成高通量厌氧反应体系；（10）将步骤（9）构建完成的96孔板降解体系于30 ^oC培养，用全波长酶标仪在特定波长下检测待测染料的吸光值，进行定时无损监测。