[发明专利]利用合成气厌氧发酵制取乙醇过程中静息细胞的制备方法

摘要

本发明属于利用微生物将合成气厌氧发酵制取乙醇技术领域，具体涉及一种微生物利用合成气厌氧发酵制取乙醇过程中微生物静息细胞的制备方法。该方法包括微生物菌种活化、厌氧条件下富集生长、离心、收集细胞沉淀、重悬浮培养等步骤。本发明所提供的制备方法，培养基经过特殊优化，克服了菌液培养过程中菌体生长本身引起的干扰，制备的厌氧微生物静息细胞生长期较为一致，可以使细胞更好的进行能量代谢，从而提高将合成气转换为乙醇的转化效率，促进利用合成气转化乙醇产业化的进行。

主权项

一种利用合成气厌氧发酵制取乙醇过程中微生物静息细胞的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）将微生物菌种活化，厌氧条件下富集生长；所述富集生长采用生长培养基，生长培养基为液体培养基，1L容量配方如下： NaCl 1.0~1.5g，NH4Cl 1.0~2.0g，KCl 0.10~0.30g，MgSO4 0.2~0.5g，CaCl2 0.04~0.08g，KH2PO4 0.20~0.50g，酵母膏0.2~0.6g，L‑cys 0.1~0.3g，MES 4~8g，微量元素溶液10mL，维生素溶液10mL，余量为水，pH 4.5~6.5；所述微量元素溶液，1L容量配方如下：N(CH2COOH)3 1.00~3.00g，MgSO4 0.50~1.50g，(NH4)2SO4·FeSO4·6H2O 0.5~1.0g，CoCl2·6H2O 0.10~0.30g，ZnSO4·7H2O 0.10~0.30g，CuCl2·2H2O 0.01~0.03g，NiCl2·6H2O 0.01~0.03g，Na2MoO4·2H2O 0.01~0.03g，Na2O4Se 0.01~0.03g，Na2WO4·2H2O 0.01~0.03g，余量为水；所述维生素溶液，1L容量配方如下：VB6 8.00~12.00g，维生素B1 4.00 ~6.00g， VB2 3.00~7.00g，泛酸钙3.00~7.00g，硫辛酸4.00~6.00g，C9H11O2N 4.00~6.00g，VB3 4.00 ‑6.00g，VB12 3.00~7.00g，维生素H 1.00~3.00g，叶酸1.00 ~3.00g，余量为水；（2）将步骤（1）中生长稳定后的微生物菌液离心，收集细胞沉淀；所述生长稳定为生物量稳定；所述离心为， 6000~10000 rpm离心10~30min；（3）将步骤（2）收集得到细胞沉淀悬浮于NG3培养基，悬浮时，以同等体积生长培养基中离心获得的细胞沉淀悬浮于同等体积的NG3培养基计；所述NG3培养基与生长培养基相比，缺少CaCl2和酵母膏成分；厌氧培养1~2d，至NG3培养基中微生物细胞生物量是生长培养基中微生物细胞生物量1.0~1.5倍时，结束培养，培养结束后所得菌液培养物即为静息期的微生物细胞；步骤（1）中所述微生物菌种为：Clostridium carboxidivorans P7、Clostridium strain P11、Clostridium. Ljungdahlii或Clostridium autoethanogenum DSM10061。