[发明专利]一种PCR试剂盒中防止阳性对照污染待测样品的方法

摘要

本发明涉及一种PCR试剂盒中防止阳性对照污染待测样品的方法，通过具体分析阳性模板核酸序列，在特定条件下下将用做阳性对照的模板缩短50‑100bp左右的碱基，完成相关PCR反应后，通过琼脂糖凝胶电泳即可观察和区分出待检样品的阳性条带是真阳性还是因操作失误造成待检样品中污染阳性对照而产生的假阳性。本发明能不改变反应过程的情况下直观反映各种样品检测的真实信息，不会出现假阳性。

主权项

一种PCR试剂盒中防止阳性对照污染待测样品的方法，其特征在于，阳性模板通过以下步骤制备：分析新城疫检测技术国家标准GB/T 16550‑2008提供引物扩增的片段序列，在下述条件下将该系列通过人工合成或利用其他分子生物学方法在片段中间删减100bp，使片段长度为435bp，连接T载体后作为阳性模板，所述条件为：1)两者具有相同或相近的GC百分比；2)未增加或减少发卡结构；3)未增加或减少二聚体、错配的δG值；4)扩增片段超过450bp，阳性对照模板缩短100bp；低于450bp，阳性对照模板缩短50bp；5)不在靠近上下游引物的地方删减碱基；人工合成的序列为：序列2：ATGGGCTCCAGATCTTCTACCAGGATCCCAGTACCCCTGATGCTGACTGTCCGACTTGTGCTGGCACTGAGTTGCGTCTGCCCGACCAGCTCCCTTGATGGCAGGCCTCTTGCAGCTGCAGGGATTGTGGTAACAGGAGACAAGGCAGTCAACATATACACCTCATCTCAGACAGGGTCAATCATAGTCAAGTTACTCCCAAATATCAAGAGTCTGTGACCACATCTGGAGGAGGGAAACAGGGACGTCTTATAGGCGCCATTATCGGTGGTGCGGCTCTCGGGGTTGCAACCGCTGCACAGATAACAGCAGCCTCGGCTCTAATACAAGCCAATCAAAATGCTGCCAACATTCTCCGGCTTAAGGAGAGCATTGCTGCAACCAATGAGGCTGTGCACGAGGTCACTGACGGATTATCACAACTAGCAGTGGCAG。