[发明专利]一种具有增强免疫调节作用的类球红细菌纳米粉及其制备方法

摘要

一种具有增强免疫调节作用的类球红细菌纳米粉及其制备方法，属于类球红细菌技术领域。本发明用苹果酸钠、葡萄糖、硫酸铵和酵母浸粉为主要原料，生产具有增强免疫调节作用的纳米粉的方法，采用的菌株是一株具有增强免疫调节作用的类球红细菌(Rhodobacter Sphaeroides)。本发明将类球红细菌制备为纳米粉，经动物实验表明该纳米粉具有增强免疫调节作用。由于其尺寸上的微观性，纳米材料具有与传统材料不同的表面效应、小尺寸效应、量子尺寸效应及宏观量子隧道效应，因此类球红细菌纳米粉便于实验动物和人体所吸收利用。采用高能纳米冲击磨制备纳米粉容易实现扩大生产和产业化，将其开发为功能(保健)食品有利于人体健康。

主权项

一种具有增强免疫调节作用的类球红细菌纳米粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）类球红细菌菌种活化配制固体培养基，质量百分含量如下：葡萄糖1‑5 %，胰蛋白胨0.5‑5 %，酵母浸粉0.5‑5%，氯化钠0. 5‑2%，琼脂2%，pH =7‑9；并将其与培养皿置于121℃高压蒸汽灭菌15‑30 min；然后无菌条件下，倒平板，挑类球红细菌进行平板划线；将平板置于28‑37 ℃培养，2‑7 d；配置斜面培养基，斜面培养基与上述固体培养基一样，并于121 ℃高压蒸汽灭菌15‑30 min；无菌条件下，挑取上述平板上的类球红细菌单菌落进行斜面接种；然后将斜面置于28‑37 ℃培养，2‑7 d；（2）类球红细菌发酵①种子培养：种子培养基液体，质量百分含量如下：葡萄糖1‑5 %，胰蛋白胨0.5‑5 %，酵母浸粉0.5‑5 %，氯化钠0. 5‑2%，pH =7‑8；并于121 ℃高压蒸汽灭菌15‑30 min；用无菌接种环从步骤（1）活化后的类球红细菌斜面中取菌体一环，接种到盛有种子培养基液体的三角瓶中，为250 mL三角瓶中含有 20 mL种子培养基液体，于28‑37 ℃，150‑200 r/min摇床振荡培养12‑36 h，得到液体种子；然后无菌条件下，将得到的液体种子按5‑10%的接种量接种于灭菌的种子培养基中，于28‑37 ℃，150‑200 r/min摇床振荡培养12‑36 h，得到活化的液体种子；②发酵：液体发酵培养基，质量百分含量如下：苹果酸钠0.4‑5%，葡萄糖1‑10%，硫酸铵0.5‑5%，酵母浸粉0.5‑5%，磷酸氢二钾0.05‑0.15%，磷酸二氢钾0.03‑0.10%，pH=7‑8，生长因子溶液0.5‑2%，并于121℃高压蒸汽灭菌15‑30 min，其中生长因子溶液配方：维生素B1 0.05‑0.2%，烟酰胺（VPP）0.05‑0.2%，生物素0.001‑0.002%，生长因子过滤除菌；按照5‑10%的接种量将①摇床活化的液体种子接种到盛有液体发酵培养基的三角瓶中，于28‑37 ℃，150‑200 r/min摇床振荡培养24‑48 h，得类球红细菌发酵液；（3） 类球红细菌离心分离取步骤（2）类球红细菌发酵液于6000‑20000 rpm离心5‑30min，收集菌体，弃上清，再用蒸馏水清洗菌体1‑3次，分别于6000‑20000 rpm离心5‑30min，收集菌体，即得类球红细菌湿菌体；（4）制备类球红细菌纳米粉将类球红细菌湿菌体在‑40—‑60 ℃，压力小于1pa的条件下冷冻干燥得干菌体，将干菌体放入高能纳米冲击磨罐中，于1‑8℃下震磨6‑10h，将干菌体磨成纳米粉，即得具有增强免疫调节作用的类球红细菌纳米粉。