[发明专利]一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法

摘要

本发明公开了一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法，是先将待筛选的若干种中药材分别粉碎，再分别用有机溶剂提取40-60分钟，离心分离，得若干上清液；此上清液即作为待测样本溶液；再在微孔板中加入反应体系；将空白对照样品和待测样品一起置于酶标仪中震荡孵育30min后，迅速在每孔中加入0.04～0.2mmol/L的乙醛溶液15μL，摇匀后立即开始测定各样品在340nm处的吸光值；利用酶标仪自带软件记录吸光度值并绘制出空白对应样品及待测样品吸光度值变化曲线；得出样品曲线净面积NetAUC值；本发明方法一次可筛选上百种甚至几百种中药材,快速、准确率高，操作方便。

主权项

一种具有解酒功效的中药材及活性因子的高通量筛选方法，其特征在于包括下述步骤：  a.将待筛选的若干种中药材分别粉碎至20～100目，分别用30%～90%乙醇、甲醇或丙酮中的一种，提取40‑60分钟，离心分离，得若干上清液；或将待筛选的若干活性因子分别用30%～90%乙醇、甲醇或丙酮中的一种，提取40‑60分钟，离心分离，得若干上清液；此上清液即作为待测样本溶液；  b.在微孔板中的每个微孔中加入下述反应体系：50‑200mmol/L、pH7.8‑8.5的磷酸钾缓冲液75‑90μL,0.1～0.5mmol/L的二硫苏糖醇10‑15μL,0.1～2mg/ml乙醛脱氢酶20‑25μL,0.0625～20mmol/L  NAD+溶液30μL；   c.再在上述其中一个微孔中加入90 mmol/L、pH8.5的磷酸钾缓冲溶液25μL作为空白对照样品，余下微孔中一一加入步骤a.所制备的待测样本溶液25μL，作为待测样品并编号；然后一起置于酶标仪中震荡孵育30min后，迅速在每孔中加入0.04～0.2 mmol/L的乙醛溶液15μL，摇匀后立即开始测定各样品在340nm处的吸光值；   d.利用酶标仪自带软件记录吸光度值并绘制出空白对照样品及待测样品吸光度值变化曲线；将所得到的待测样品曲线的积分面积减去空白对照样品的曲线积分面积，得出待测样品曲线净面积Net AUC值，此值即为激活率；激活率为正数时证明该样品中所加入的中药材或活性因子具有激活乙醛脱氢酶的能力，也说明该药材或活性因子具有解酒的功效；反之，激活率为负数时，说明该样品中所加入的中药材或活性因子不具备激活或具有抑制乙醛脱氢酶的能力，也说明该药材或活性因子不具有解酒的功效。