[发明专利]假交替单胞菌胞外多糖在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用

摘要

本发明涉及一种假交替单胞菌胞外多糖在抑制乳腺癌细胞增殖中的应用。所述的假交替单胞菌(Pseudoaltermonas sp.)S-5胞外多糖的分子量为397kDa，由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成，其摩尔比为4.8:50.9:44.3。本发明公开了假交替单胞菌(Pseudoaltermonas sp.)S-5胞外多糖在体外能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖，抑制肿瘤细胞的生长，且这种抑制主要是通过假交替单胞菌(Pseudoaltermonas sp.)S-5胞外多糖诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡实现的。因而，该胞外多糖具有在制备抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖药物中的应用前景。

主权项

一种假交替单胞菌(Pseudoaltermonas sp.)S‑5胞外多糖在制备抑制乳腺癌细胞MDA‑MB‑231增殖药物中的应用；所述的胞外多糖按如下步骤制备：(1)将菌种保藏号为CGMCC NO.3433的假交替单胞菌(Pseudoaltermonas sp.)S‑5经活化、扩大培养后，制得扩繁菌种；(2)将步骤(1)制得的扩繁菌种接种于发酵培养基中，向发酵培养基中加入发酵培养基重量0.3％的灭菌豆油后，7‑9℃有氧搅拌培养50～60h，搅拌速度160～170r/min，得液体发酵液；(3)将步骤(2)制得的液体发酵液离心，收集上清液；(4)将步骤(3)制得的上清液在50～60℃条件下，旋转蒸发浓缩至原体积的1/4，得浓缩液，然后向浓缩液中加入体积百分比为95％的乙醇，经醇沉后，离心，收集沉淀；(5)将步骤(4)收集的沉淀用水溶解，加入1/3体积的seveage试剂脱去蛋白质，制得粗糖溶液；(6)将步骤(5)制得的粗糖溶液通过大孔树脂D‑301R脱色后，再经过DEAE‑Fast Flow阴离子交换柱和Sephadex G‑75层析柱分离，制得纯化的胞外多糖溶液；(7)将步骤(6)制得的胞外多糖溶液经真空冷冻干燥后，制得适冷微生物胞外多糖纯品；所述步骤(2)中的发酵培养基组分如下，均为重量百分数：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，葡萄糖2％，氯化钠2％，人工海水余量，pH7.0。