[发明专利]利用无动物血清培养体系大规模扩增人外周血DNT细胞的方法有效
| 申请号： | 201410259944.0 | 申请日： | 2014-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN104109653B | 公开（公告）日： | 2017-06-13 |
| 发明（设计）人： | 杨黎明;边金铎;陈艳;张丽 | 申请（专利权）人： | 浙江瑞顺生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 杭州天欣专利事务所(普通合伙)33209 | 代理人： | 陈琳 |
| 地址： | 310053 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用无动物血清培养体系大规模扩增人外周血DNT细胞的方法。包括以下步骤1）采集人体外周血样品，2）体外分离纯化获得DNT细胞，3）体外培养DNT细胞，4）洗涤、收集DNT细胞，其特征在于所述的步骤3）依次在培养瓶和培养袋中培养，采用无动物血清培养基，再加上1~10v%的AB血清、1~10v%的自体血浆或1~10v%的人血白蛋白中的一种或多种作为添加蛋白成分。本发明所述方法安全、高效、经济、可产业化、可用于临床应用。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 动物 血清 培养 体系 大规模 扩增 人外周血 dnt 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种利用无动物血清培养体系大规模扩增人外周血 DNT 细胞的方法，依次包括以下步骤 ：1）将人体外周血样品进行处理；2）体外分离纯化获得 DNT 细胞；3）体外培养 DNT 细胞，具体过程为 ： 0~3 天在培养瓶中培养，培养瓶已用 1~10 µg/ml 的抗人 CD3 单克隆抗体包 被，采用无动物血清培养基，添加 50~200 单位 /ml 的庆大霉素、100~1000 IU/ml 的重组人 白介素 2、1~5 ng/ml 的重组人白介素 4 、1~20ng/ml 的重组人白介素 7 、1~20 ng/ml 的重 组人白介素 12、1 ~10v% 的自体血浆和 1 ~10v% 的 AB 血清 ； 3~7 天在培养瓶中培养，采用无动物血清培养基，添加 50~200 单位 /ml 的庆大霉素、 100~1000 IU/ml 的重组人白介素 2 、1~5 ng/ml 的重组人白介素 4 、1~20 ng/ml 的重组人 白介素 7、1~20 ng/ml 的重组人白介素 12 、1 ~5v% 的自体血浆和 1 ~10v% 的 AB 血清 ； 7~10 天在培养瓶中培养，采用无动物血清培养基，添加 50~200 单位 /ml 的庆大霉素、 100~1000 IU/ml 的重组人白介素 2 、1~5 ng/ml 的重组人白介素 4 、50~200 ng/ml 的可溶 性抗人 CD3 单克隆抗体、1~20 ng/ml 的重组人白介素 12、1 ~10v% 的自体血浆和 1 ~10v% 的 AB 血清 ； 10~20 天在培养袋中培养，采用无动物血清培养基，添加 50~200 单位 /ml 的庆大霉素、 100~1000 IU/ml 的重组人白介素2、1~5 ng/ml 的重组人白介素 4、50~200 ng/ml 的可溶性 抗人 CD3 单克隆抗体、1~20 ng/ml 的重组人白介素 12、1 ~10v% 的人血白蛋白和 1 ~10v% 的 AB 血清；4）洗 涤、收集 DNT 细胞。
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