[发明专利]一种竞争ELISA试剂盒检测牛布氏杆菌病的方法

摘要

一种竞争ELISA试剂盒检测牛布氏杆菌病的方法，属于生物技术检测领域，将超声裂解处理的牛种布鲁氏菌A99包被ELISA酶标板；再将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru-5C10和稀释的待检血清样品加入酶标板的板孔中；并同时分别将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru-5C10分别和已知的阴、阳性血清加入酶标板的板孔中，水浴后用PBST洗涤，再向各板孔中分别加入抗小鼠IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应，测得各板孔的OD450值，计算各板孔的抑制率。本发明利用建立的cELISA方法对小肠结肠炎耶尔森菌O9和大肠杆菌O157高免阳性血清进行检测，PI值均低于30%，可以有效地排除假阳性结果的发生。

主权项

一种竞争ELISA试剂盒检测牛布氏杆菌病的方法，其特征在于包括以下步骤：1）将超声裂解处理的牛种布鲁氏菌A99包被ELISA酶标板；2）将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru‑5C10和稀释的待检血清样品加入酶标板的板孔中；并同时分别将抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru‑5C10分别和已知的阴、阳性血清加入酶标板的板孔中，37℃水浴后，用PBST洗涤，向各板孔中分别加入抗小鼠IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应；3）测得各板孔的OD₄₅₀值；4）由公式100×（1‑OD_阴性对照/OD_待检样品）%分别计算各板孔的抑制率；其中，OD_阴性对照为加入了抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru‑5C10和已知的阴性血清的板孔的OD₄₅₀值；OD_待检样品为加入了抗布鲁氏菌特异单克隆抗体bru‑5C10和稀释的待检血清样品的板孔的OD₄₅₀值；5）判定待检血清样品：抑制率≥30%，则判定待检血清样品为阳性。