[发明专利]一种高通量鉴定烟草青枯病抗性的方法

摘要

本发明公开了一种高通量鉴定烟草青枯病抗性的方法，包括以下步骤：将粒度为2-4mm的石英砂于121℃高温下灭菌30分钟，冷却后将其播入无菌12孔细胞培养板中，每孔10g石英砂，每孔加入4ml无菌水；将待测烤烟种子播种于12孔细胞培养板的石英砂上，播种后将12孔细胞培养板置于25℃、RH>80%、16h光照和8h黑暗交替条件下培养；待烟种发芽后，无菌条件下向培养烟苗的12孔微孔板内添加霍格兰营养液，每孔2ml，继续置于25℃、RH>80%、16h光照和8h黑暗交替条件下培养，待烟苗5-6叶期时用于抗病性鉴定；接种液制备及接种；病情调查与分级。本发明能高通量、高效率鉴定烟草青枯病抗性，且一次可以鉴定的烤烟品种多。

主权项

一种高通量鉴定烟草青枯病抗性的方法，包括以下步骤：（1）培育无菌烟苗将粒度为2‑4mm的石英砂于121℃高温下灭菌30分钟，冷却后将其播入无菌12孔细胞培养板中，每孔10g石英砂，每孔加入4ml无菌水；将待测烤烟种子播种于12孔细胞培养板的石英砂上，播种后将12孔细胞培养板置于25℃、RH>80%、16h光照和8h黑暗交替条件下培养；（2）烟苗的日常管理待烟种发芽后，无菌条件下向培养烟苗的12孔微孔板内添加霍格兰营养液，每孔2ml，继续置于25℃、RH>80%、16h光照和8h黑暗交替条件下培养，待烟苗5‑6叶期时用于抗病性鉴定；（3）接种液制备及接种将烟草青枯菌菌株使用前在劳尔氏菌选择性培养基上活化48h，挑典型单菌落至劳尔氏菌选择性培养基平板上，30℃培养48h，将菌苔刮下，接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基培养液，30℃震荡培养36至48h；培养液于4000×g离心20min收集菌体，用无菌水配成菌悬液，调整菌的浓度为1×10⁸cfu/mL，按照0.5 ml/孔将菌悬液添加至12孔细胞培养板的微孔中；（4）病情调查与分级接菌后20d调查发病情况，以后每隔3d调查一次发病情况；记录发病率及病情指数，以感病对照发病率达到80%左右的病情指数作为品种抗性评价标准。