[发明专利]棉花杂交种亲子鉴定方法

摘要

本发明提供一种棉花杂交种亲子鉴定方法，该方法使用分布于棉花基因组26条染色体的36对SSR核心引物(Seq ID No.1‑72)，通过对两个亲本与待测杂交种进行DNA指纹检测，采用亲权排除位点与双亲杂合位点统计分析后鉴定假设杂交种与亲本的亲子关系。本发明方法操作简单，准确稳定，适用于棉花杂交种亲子关系快速鉴定。

主权项

1.一种棉花杂交种亲子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)分别提取亲本棉花以及待测棉花杂交种籽粒样品中的DNA；2)分别以步骤1)中提取的DNA为模板，利用用于鉴定棉花杂交种的SSR‑PCR引物组合进行PCR扩增反应；3)分析亲本及杂交种的PCR扩增产物；所述用于鉴定棉花杂交种的SSR‑PCR引物组合，由下列引物对组成：NAU3254‑F和NAU3254‑R、NAU2277‑F和NAU2277‑R、NAU1190‑F和NAU1190‑R、NAU1071‑F和NAU1071‑R、MUCS101‑F和MUCS101‑R、NAU934‑F和NAU934‑R、NAU1200‑F和NAU1200‑R、NAU874‑F和NAU874‑R、NAU905‑F和NAU905‑R、NAU1362‑F和NAU1362‑R、BNL3257‑F和BNL3257‑R、BNL1317‑F和BNL1317‑R、BNL2960‑F和BNL2960‑R、BNL1231‑F和BNL1231‑R、BNL3442‑F和BNL3442‑R、BNL3261‑F和BNL3261‑R、BNL1421‑F和BNL1421‑R、BNL2449‑F和BNL2449‑R、CIR246‑F和CIR246‑R、NAU2437‑F和NAU2437‑R、BNL830‑F和BNL830‑R、JESPR292‑F和JESPR292‑R、NAU1167‑F和NAU1167‑R、NAU1028‑F和NAU1028‑R、CIR216‑F和CIR216‑R、NAU3110‑F和NAU3110‑R、BNL3646‑F和BNL3646‑R、BNL3171‑F和BNL3171‑R、NAU1103‑F和NAU1103‑R、BNL4030‑F和BNL4030‑R、BNL3140‑F和BNL3140‑R、JESPR110‑F和JESPR110‑R、NAU1125‑F和NAU1125‑R、BNL827‑F和BNL827‑R、NAU3588‑F和NAU3588‑R、CIR170‑F和CIR170‑R，其中，F表示上游引物，R表示下游引物；上述引物对的核苷酸序列分别如Seq ID No.1‑72所示；步骤3)中分析PCR扩增产物采用6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后通过银染检测，对棉花亲本样品与待测杂交种样品的36个位点的DNA指纹谱带进行比对分析：亲权排除位点数≥2，判定待测杂交种与亲本无亲子关系；0≤亲权排除位点数≤1，且双亲杂合位点数≥2，判定待测杂交种与亲本存在亲子关系；0≤亲权排除位点数≤1，且双亲杂合位点数≤1，判定待测杂交种为亲本或近似亲本。