[发明专利]BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用

摘要

本发明涉及BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用。本发明公开的BHK-21细胞全悬浮培养生产新城疫疫苗的工艺包括以下步骤：(1)病毒株选育：鸡胚培养的新城疫疫苗种毒接种单层BHK-21细胞，加入病毒维持液培养，得到适应BHK-21细胞的新城疫疫苗毒，并进行系统鉴定；(2)悬浮细胞株的驯化与选育：适合新城疫病毒培养用全悬浮BHK21细胞的驯化和基础种子的建立；(3)悬浮细胞扩大培养；(4)接毒和收毒：适应BHK-21细胞的新城疫疫苗毒接种及其毒液收获；(5)增殖新城疫疫苗毒的毒价测定与配苗。本发明使得新城疫疫苗实现了由鸡胚向哺乳动物细胞大规模培养生产的转变，这不仅简化了新城疫疫苗的生产工艺，降低生产成本，还大大提高疫苗的产量和质量。

主权项

1.BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用，如权利要求1所述的应用，其特征在于包括以下步骤：(1)病毒株的选育将新城疫病毒Mukteswar株及其它疫苗毒株经BHK-21细胞连续传代，获得的BHK-21细胞适应毒，命名为新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)Mukteswar株/BHK-21，该毒株已于2014年06月17日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCCNo.8889；(2)悬浮细胞株的驯化与选育将适合新城疫病毒培养用BHK-21细胞进行全悬浮驯化选育，获得全悬浮的BHK-21/IVDC株，该细胞株已于2014年06月17日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.9319；(3)悬浮细胞扩大培养复苏BHK-21/IVDC株悬浮细胞，采用悬浮细胞培养瓶逐级放大为5个500ml规格的悬浮培养瓶，待细胞浓度达到4×10⁶细胞/ml后，全部转移至美国NBSBioFlo115型总体积14L的反应器，补加培养基至10L，反应器参数设定四路气体，分别为空气、氧气、氮气和CO₂，转速80r/min，温度37℃，pH7.2，溶氧60％，分别于培养24h、48h采样进行细胞计数和活力检测。(4)接毒和收毒当BioFlo115型反应器中活细胞密度不低于2.5×10⁶细胞/ml时，按细胞培养液体积的1％比例接入新城疫病毒Mukteswar株/BHK-21，反应器参数设定四路气体，分别为空气、氧气、氮气和CO₂，转速80r/min，温度37℃，pH7.4，溶氧60％，，于接毒后24h起，每隔2h采样进行细胞计数，活细胞密度低于0.5×10⁶后，收获病毒液即为抗原。