[发明专利]GnRH多肽‑甲氨蝶呤偶联物、其制备方法及用途

摘要

本发明公开了一种下式所示的GnRH‑甲氨蝶呤偶联物，其可由GnRH多肽或其类似物与甲氨蝶呤或其衍生物制得。本发明还提供了GnRH‑甲氨蝶呤偶联物的制备方法和其在制备抗肿瘤药物方面的用途，本发明的GnRH‑甲氨蝶呤偶联物制备工艺简单，产率高，易纯化，且在抗肿瘤方面具有良好的肿瘤靶向性，能够将药物浓集于肿瘤部位。

主权项

一种GnRH多肽‑甲氨蝶呤偶联物的制备方法，其特征在于：所述GnRH多肽‑甲氨蝶呤偶联物具有如下结构：所述方法包括使GnRH多肽与甲氨蝶呤活性酯发生偶联反应，在GnRH多肽含有D‑Lys单元中的氨基的情况下，通过使甲氨蝶呤活性酯与GnRH多肽的D‑Lys上的氨基发生酰胺化反应制备得到所述GnRH多肽‑甲氨蝶呤偶联物；还包括如下纯化步骤：反应后，向反应混合物中缓慢加入乙醚进行沉淀，终止反应，静置24h，过滤沉淀，用乙醚洗涤沉淀，将沉淀溶解于DMF溶液后，通过反相制备液相纯化，旋转蒸发除去有机溶剂，然后将浓缩的水溶液冷冻干燥，冷冻温度为‑40℃以下，得到GnRH多肽‑甲氨蝶呤偶联物；甲氨蝶呤活性酯与GnRH多肽的摩尔比为1.5:1；反应温度为25℃；反应时间为4小时；所述甲氨蝶呤活性酯的合成包括如下步骤：(1)将甲氨蝶呤与羰基活化试剂反应以活化γ‑位羧基；所述甲氨蝶呤与羰基活化试剂的摩尔比为1:3；所述羰基活化试剂选自EDC.HCl、DCC和DIC；反应温度为25℃；反应溶剂为DMSO；反应时间为1.5‑2.5h；(2)向上步反应混合物中加入NHS和DMAP，所述甲氨蝶呤与NHS的摩尔比为1:2‑1:4，所述DMAP与甲氨蝶呤的摩尔比为1:2，以及反应时间为24小时。