[发明专利]一种人血小板同种抗原系统基因分型的PCR‑SBT方法及试剂

摘要

本发明提供一种人血小板同种抗原系统基因分型的PCR‑SBT方法，该方法包括以下步骤制备人基因组DNA；扩增人基因组DNA中抗原系统的基因序列；将扩增产物进行双酶切纯化；将纯化产物进行测序PCR反应；将测序产物进行醋酸钠‑乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；将获得的序列通过软件分析确定其基因型。本发明还提供上述分型方法所用的试剂。本发明可作为一种独立的、应用广泛的鉴定方法，解决了HPA 28个抗原系统准确定型的问题，发挥PCR‑SBT对HPA基因定型操作高通量、结果准确的特点，在临床输血医学研究和遗传学等领域的相关应用将受到高度重视，对于医学研究单位、药学研究和试剂开发单位具有重要的现实意义。

主权项

一种人血小板同种抗原系统基因分型的PCR‑SBT方法所用的试剂，其特征在于：所述抗原系统为HPA1‑28w抗原系统，由28个抗原基因组成：HPA‑1、HPA‑2、HPA‑3、HPA‑4、HPA‑5、HPA‑6w、HPA‑7w、HPA‑8w、HPA‑9w、HPA‑10w、HPA‑11w、HPA‑12w、HPA‑13w、HPA‑14w、HPA‑15、HPA‑16w、HPA‑17w、HPA‑18w、HPA‑19w、HPA‑20w、HPA‑21w、HPA‑22bw、HPA‑23bw、HPA‑24bw、HPA‑25bw、HPA‑26bw、HPA‑27bw、HPA‑28bw，所述试剂由用于扩增28个HPA抗原基因的18个扩增引物和用于测序分析的6个寡核苷酸测序引物组成；所述用于扩增的引物为：(1)HPA‑1和HPA‑10w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑1,10F:5’TCTAAAAgCTgCggAATTgTCTTggCCTCCCAAAgTATCA3’HPA‑1,10R:5’TCCAAACTCATCAATgTATCCACCTgCTTCAggTCTCTCC3’(2)HPA‑2抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑2F:5’TgTAAAACgACggCCAgTTATCCCACAATCAgCTgCAA3’HPA‑2R:5’CAggAAACAgCTATgACCgAgATTCTCCAgCCCATTCA3’(3)HPA‑3、HPA‑9w和HPA‑27bw抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑3,9,27F:5’TCTAAAAgCTgCggAATTgTggAAgAAAgACCTgggAAgg3’HPA‑3,9,27R:5’TCCAAACTCATCAATgTATCTCTTTCAgCTCACCCCAgAC3’(4)HPA‑4、HPA‑16w和HPA‑19w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑4,16,19F:5’ACgTgggTATAAgAggCgTCAATCTTggTgggAgAAgAA3’HPA‑4,16,19R:5’CgATgCTAgACgATCCAggCCTTAggCTCCATTgACAC3’(5)HPA‑5抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑5F:5’ACgTgggTATAAgAggCgTgAgggAAggAACTgTgCTC3’HPA‑5R:5’CgATgCTAgACgATCCAgACAAgAAAgCATTgCCCTgT3’(6)HPA‑6w和HPA‑7w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑6,7F:5’ACgTgggTATAAgAggCgTgCTTgTgTTTTTgCTTTgC3’HPA‑6,7R:5’CgATgCTAgACgATCCAgggCCTTCACCTATgTTTCCA3’(7)HPA‑8w、HPA‑11w、HPA‑21w和HPA‑23bw抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑8,11,21,23F:5’TGTAAAACGACGGCCAGTTAATggAg(a/g)TggAgCAgCTT3’HPA‑8,11,21,23R:5’CAGGAAACAGCTATGACCTAgAACCTgggTgTgTgCAA3’(8)HPA‑12w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA12F:5’TCTAAAAgCTgCggAATTgTCTCCCgCTgCAgAgTAAgC3’HPA12R:5’TCCAAACTCATCAATgTATCgTTgTgTCgACAgggAAgg3’(9)HPA‑13w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑13F:5’ACgTgggTATAAgAggCgCAATAgCAACAAAgAACAATCCA3’HPA‑13R:5’CgATgCTAgACgATCCAgAgTCggAAgCCACAAAgTTC3’(10)HPA‑14w，26bw抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑14,26F‑1:5’TCTAAAAgCTgCggAATTgTATCTgTgTggTTgggAgAgC3’HPA‑14,26R‑1:5’TCCAAACTCATCAATgTATCggCTCTggTgAgCAAgAAAC3’(11)HPA‑15抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑15F:5’TGTAAAACGACGGCCAGTCCTATTCTTTgAAAAgTTgggATT3’HPA‑15R:5’CAGGAAACAGCTATGACCAAAC(C/A)AgTAgCCACCCAAgA3’(12)HPA‑17w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑17F:5’TGTAAAACGACGGCCAGTgCCTTTTCCATgAAggTgTC3’HPA‑17R:5’CAGGAAACAGCTATGACCCCAgAAATCCCCAgAgTTCA3’(13)HPA‑18w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑18F:5’TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAAgAAgACACAATAAAgCAA3’HPA‑18R:5’CAGGAAACAGCTATGACCTTggAAgggTgAgCATTTTC3’(14)HPA‑20w抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑20F:5’ACgTgggTATAAgAggCggAgCCCCgATACCATCTACA3’HPA‑20R:5’CgATgCTAgACgATCCAgAgggAgggAgATgAgAgAgC3’(15)HPA‑22bw抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑22F:5’ACgTgggTATAAgAggCgAgCCCTTgCTTTggATCTg3’HPA‑22R:5’CgATgCTAgACgATCCAgggTTgCTggAgTCAAAggAg3’(16)HPA‑24bw抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑24F:5’TCTAAAAgCTgCggAATTgTgACCTgATCgTgggAgCTTA3’HPA‑24R:5’TCCAAACTCATCAATgTATCCAgTggCTCCAACACACATC3’(17)HPA‑25bw抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑25F:5’TgTAAAACgACggCCAgTATgCCAgCTTCTCTgCATTT3’HPA‑25R:5’CAggAAACAgCTATgACCCCTCgCCAAAATCTCAACAT3’(18)HPA‑28bw抗原系统的基因序列的扩增引物，HPA‑28F:5’TCTAAAAgCTgCggAATTgTCAgTgTggCATgCTCTTTgT3’HPA‑28R:5’TCCAAACTCATCAATgTATCTgTTCTgCTCCCTCTCACCT3’，所述6条寡核苷酸测序引物序列如下：M13F:5’‑TGTAAAACGACGGCCAGT‑3’M13R:5’‑CAGGAAACAGCTATGACC‑3’PCMVF‑BD:5’‑TCTAAAAgCTgCggAATTgT‑3’PCMVR:5’‑TCCAAACTCATCAATgTATC‑3’pDC316F:5’‑ACgTgggTATAAgAggCg‑3’pDC316R:5’‑CgATgCTAgACgATCCAg‑3’。