[发明专利]一种利用小孢拟盘多毛孢液态发酵生产pestalotiollide A的方法

摘要

本发明涉及一种利用小孢拟盘多毛孢（Pestalotiopsismicrospora）液态发酵生产pestalotiollideA的方法，所述丝状真菌小孢拟盘多毛孢菌种保藏号CGMCC2694，所述方法首次采用PDB改良型培养基PLB对Pestalotiopsismicrospora进行液态深层发酵生产pestalotiollideA，并对其进行后续分离纯化工序，在分离纯化工序中使用粉末性活性炭脱色，乙酸乙酯有机溶剂萃取、减压旋转等步骤，得到pestalotiollideA的粗提物，再借助半制备型HPLC对粗提物进行层析分离，得到高纯度的pestalotiollideA产品。本发明所述的制备方法操作简单，化学试剂使用量少，分离方便，产量高，生产成本低，周期短。

主权项

一种利用小孢拟盘多毛孢液态发酵生产pestalotiollide A的方法，其特征在于，该方法首次采用PDB改良型培养基PLB对小孢拟盘多毛孢（Pestalotiopsis microspora）进行液态发酵生产pestalotiollide A，并对其进行后续分离纯化工序，具体包括如下步骤：第1步、首先将丝状真菌小孢拟盘多毛孢Pestalotiopsis microspora从甘油管中活化至PLA平板上，控制温度为24‑29℃，培养48‑96h，直至长出新鲜菌丝；第2步、将经平板培养的Pestalotiopsis microspora菌丝尖端切块接种到液体培养基PLB中，温度为24‑29℃、转速160‑190rpm、培养72‑240h，收集孢子；第3步、将经孢子培养获得的孢子悬浮液接种到发酵培养基PLB中，控制发酵培养的温度为24‑29℃、转速160‑190rpm、培养120‑288h；第4步、培养结束的发酵产物经2层滤纸减压过滤，固液分离得到Pestalotiopsis microspora发酵滤液；第5步、将第4步所得滤液使用大孔树脂或活性炭脱色；第6步、将第5步所得脱色液用有机溶剂萃取，收集有机相，减压加热蒸发至干, 甲醇溶解残留物，得到pestalotiollide A粗提物；第7步、将第6步所得粗提产物用半制备型HPLC进行纯化，得到pestalotiollide A精提物。