[发明专利]一种固液结合制备比伐卢定的方法

摘要

本发明属于多肽合成领域，涉及一种固液结合制备比伐卢定的方法，本发明采用液相和固相相结合的方法制备比伐卢定，能够很好的避免杂质肽的产生，提高粗肽纯度，降低生产成本。该方法首先采用液相法合成片段六肽Fmoc-Arg(pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-OH，然后再在固相上接肽，利用此方法可以避免产生杂质肽Biv±Gly和Biv±2Gly，还避免了固相接Arg时难以偶联完全的难题；利用此合成工艺，可以使粗肽纯度达到90%以上，降低了纯化难度，使最终产品的纯度超过99.5%，进一步降低了生产成本。与现有技术相比，本发明工艺操作简单，合成成本低，利于工业大规模生产。

主权项

一种固液结合制备比伐卢定的方法，其特征在于，包括如下步骤：（a）采用Wang树脂或2‑chlorotrityl树脂为固相载体，用Fmoc‑Leu‑OH与之偶联反应制备Fmoc‑Leu‑Wang树脂或Fmoc‑Leu‑CTC树脂，脱保护试剂脱掉保护基Fmoc后，再按序列依次偶联连接11个Fmoc保护氨基酸，得侧链保护的比伐卢定[9‑20]肽树脂；比伐卢定[9‑20]肽树脂的结构如下：Fmoc‑Asn(Trt)‑Gly‑Asp(OtBu)‑Phe‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ile‑Pro‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Tyr(tBu)‑ Leu‑树脂； （b）在液相条件下由双甘肽和Boc‑Pro‑OH为原料制备Pro‑Gly‑‑Gly ‑Gly‑‑Gly‑OH，然后再用Fmoc‑Arg(pbf)‑OH与之反应得到片段六肽Fmoc‑Arg(pbf)‑Pro‑Gly‑ Gly‑Gly‑Gly‑OH；（c）比伐卢定[9‑20]肽树脂脱Fmoc后和片段六肽Fmoc‑Arg(pbf)‑Pro‑Gly‑ Gly‑Gly‑ Gly‑OH在固相条件下缩合反应生成18肽片段肽保护树脂，再按序列依次连接上Fmoc‑Pro‑OH和Boc‑D‑Phe‑OH或Fmoc‑D‑Phe‑OH，完成比伐卢定肽树脂的制备，经裂解、纯化、冷冻干燥得比伐卢定精肽。